酵素纯化方法讲述.PDF

B2 酵素純化方法 酵素純化方法 Enzyme Purification 純化酵素前要先把儀器及用具建立好，並熟悉所有的基本操作方法，以免事倍功半；最主要 的純化工具為液相色層分析法，有很多種操作方式，以便應用在各種不同的蛋白質樣本。 1 酵素純化實驗室︰ 實驗室的設備與經營管理，在有形或無形中，影響實驗的品質或其成敗甚鉅。 1.1 儀器： a. 基本設備： 小型儀器可歸納成 電泳 與 層析 兩大類，大型儀器主要有 離心機 及 光度計 兩類。 (1) 基本設備有： 純水製造系統、製冰機、高速冷凍離心機 (20,000 rpm) 、微量離 心機、電泳及轉印系統 (包含供電器) 、ELISA 光度計，及各種層析管柱系統 (包 含分劃收集器) 。其中電泳與層析包含很多獨立的小型器具，使用上較複雜。 (2) 個人電腦及周邊： 今日的實驗室已經離不開電腦，不管是套裝軟體或者網路的 應用，都不可缺乏。 (3) 進一步的設備有： 超高速離心機、冷凍乾燥機、超微膜過濾系統、雙向電泳、 等電焦集電泳系統、分光光度計 (UV 及可見光) 、HPLC 或 FPLC 。 (4) 特別的設備有： 液相閃爍計數器、原子吸收光譜分析儀、毛細管電泳，其他貴 重儀器如：蛋白質定序儀、質譜儀、影像分析系統、分子結構電腦工作站。 b. 儀器管理及使用： (1) 每件儀器應指定專人管理，負責保管零附件、說明書，並做初級保養。儀器若 不能正常使用，並發揮其最大服務功能，則其設置純為枉然。 (2) 光學或精密儀器，應放在有除溼機的密閉室；發熱的器具應當集中放在通風良 好處，並且注意電容量是否足夠，以免過荷造成災害。 (3) 使用儀器前，要先熟悉操作法；有問題必請教管理人，使用前後應登記 (登入、 登出) ，有任何毛病要立刻反映，不可隱瞞。 c. 冰箱： (1) 應妥善規劃貯位，詳細表列內藏物品；藥品分類用小盒裝在一起 (貨櫃化) ，勿 零散堆積，以免臨時翻找費時，導致冰櫃失溫。 ECX 2005 109 B2 酵素純化方法 (2) 零下的冷凍櫃，勿使用無霜冰箱；因為定時除霜裝置會造成冰箱內溫度上升， 藥品可能會因反復『凍結-解凍 』而失去活性；若不得已使用自動除霜冰箱，可 裝在普利龍盒子內，使藥品傷害降至最低，也可減輕停電所造成的傷害。 (3) 時時注意冰箱門一定要關好，尤其是零度以下的冰箱，若因門不閉緊而造成回 溫，對藥品及冰箱都是大災難。 1.2 小型器具及消耗品： a. 常用小型器具： 均質機或果汁機、磨粉機、pH 測定計、天平、水浴、冰筒、自動吸管 (20, 200, 1000 μL 三種) 、磁鐵攪拌機、試管振盪器、試管架、滴管。 b. 公用器具： 應集中放在定位，用畢立刻清理歸位！ 自動吸管應經常校正，可吸取純水在天平 秤之，每 1.0 mL 水應秤得 1.0 gm ，若誤差在3% 以上，立即送修。 c. 常用消耗品： 自動吸管頭 (黃色及藍色) 、微量離心管(microfuge tube) 、大小離心管、濾紙、紗布、 棉花、手套、擦拭紙、透析袋、保鮮膜、鋁泊紙及玻璃試管等。 1.3 藥品：