草鱼出血病混合感染的嗜水气单胞菌的分离、鉴定及理化特性.PDF

微生物学通报 AUG 20, 2009, 36(8): 1170~1177 Microbiology © 2009 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 草鱼出血病混合感染的嗜水气单胞菌的 分离、鉴定与理化特性 1 1 1* 1,2 1 1 1 1 邓国成 江小燕 叶 星 刘明智 许淑英 刘礼辉 白岳强 罗 霞 (1. 510380) (2. 201306) 摘 要: 从患出血病草鱼的肝脏病灶中分离筛选出 2 株致病菌。取病鱼样品组织过滤液接种 CIK 细胞、培养, 电镜下观察到细胞质中含有草鱼呼肠孤病毒样颗粒和包涵体, 病毒颗粒大小65 nm~ 70 nm, 包涵体0.46 μm~1.81 μm 。人工回归感染实验显示分离的菌株及细胞毒悬液均能使草鱼致 病死亡。对分离菌株进行细胞形态学、理化特性分析及药敏试验, 初步判定所分离的 2 株菌均为 嗜水气单胞菌。进一步对菌株进行DNA 分子鉴定, 结果显示2 株菌的 16S rRNA 基因、促旋酶亚 单位蛋白(gryB)基因均与 GenBank 上的嗜水气单胞菌相应的基因具有较高的同源性。在根据已知 序列分别构建的2 个基因的分子系统进化树中2 株菌均与嗜水气单胞菌聚类。同时2 个菌株均可 扩增到气溶素基因(aerA)和丝氨酸蛋白酶基因(ahpA), 提示它们均可能为嗜水气单胞菌强毒株。综 合人工回归感染实验与毒力基因鉴定结果可认为所分析的草鱼出血病病例存在着病毒与嗜水气单 胞菌的混合感染。 关键词: 草鱼, 出血病, 嗜水气单胞菌, 混合感染, 16S 核糖体基因, 促旋酶 B 亚单位蛋白基因, 气溶素基因, 丝氨酸蛋白酶基因 Isolation, Identification and Characterization of Aeromonas hydrophila from Hemorrhagic Grass carp DENG Guo-Cheng1 JIANG Xiao-Yan1 YE Xing1* LIU Ming-Zhi1,2 XU Shu-Ying1 LIU Li-Hui1 BAI Yue-Qiang1 LUO Xia1 (1. Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou, Guangdong 510380, China) (2. College of Aqua-life Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China) Abstract: Two strains of infectious bacteria and a GCRV-like virus were isolated from grass carp which seemed to be infected by both virus and bacteria in Guangdong and Fujian provinces. CIK cells were inoculated with tissue fluid filtrated from the diseased fish. GCRV-like vi