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螺旋藻多糖对HSV【摘要】 目的 探讨钝顶螺旋藻多糖(PSP)对HSV-2糖蛋白gB mRNA表达的影响及其机制，为进一步开发该药提供理论依据。方法 以不同剂量的PSP作用于HSV-2感染的Vero细胞，应用地高辛标记寡核苷酸探针，检测HSV-2糖蛋白gB mRNA的表达。结果 PSP作用组HSV-2糖蛋白gB mRNA的表达显著低于阳性对照组(P＜0.01)。结论 PSP抗HSV-2作用的机制之一为抑制HSV-2糖蛋白gB基因的转录。 【关键词】 螺旋藻多糖；单纯疱疹病毒2型；原位杂交 Inhibition of HSV-2 glycoprotein gB mRNA expression by polysaccharide from spirulina platensis(PSP) 【Abstract】 Objective To explore the effects and mechanism of PSP on the expression of HSV-2 gB mRNA and to provide a theoretical support for developing new drugs.Methods PSP was applied at various concentrations to Vero cells infected by HSV-2， In situ hybrization was adopted to explore the expression of HSV-2 gB mRNA with digoxigenin(DIG)-labeled HSV-2 oligoprobe. Results HSV-2 gB mRNA were less expressed in PSP treated group than that in the control (P＜0.01).Conclusion One of the mechanism of PSP against HSV-2 may be explained by the considerable inhibition of HSV-2 gB gene trscription. 【Key words】 polysaccharide from spirulina platensis; HSV-2; in situ hybrization 单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus-2， HSV-2)在人群中感染较为普遍。孕妇生殖器感染可引起早产、流产、死胎、胎儿畸形以及智力低下等，并与子宫颈癌的发生密切相关［1，2］。近几年研究表明：钝顶螺旋藻多糖（polysaccharides from Spirulina platensis，PSP）是钝顶螺旋藻中具有抗肿瘤、抗辐射、抗病毒和免疫调节作用的重要生物活性物质［3，4］。我们的前期实验结果表明，PSP有抗HSV-1的作用，但PSP抗HSV-2的实验研究未见报道。本文研究了PSP对HSV-2糖蛋白gB mRNA表达的抑制作用，结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂配制 螺旋藻多糖：参照文献［5，6］，采用改良的三氯乙酸去蛋白法提取螺旋藻多糖，纯度达92％以上。以双蒸水配成10mg/ml母液，过滤除菌，分装，4℃保存，临用时以DMEM培养基稀释至所需浓度。 细胞培养所用的DMEM干粉培养基为美国GIBCO公司产品，胰酶为Amersco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品；地高辛DNA检测试剂盒为Roche公司产品。 1.2 细胞株与病毒 非洲绿猴肾细胞Vero细胞株为本室保存传代细胞系。于DMEM基础培养液中加入10%的新生牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素，置5％CO2孵箱中37℃培养，3天传代1次。标准单纯疱疹病毒2型（HSV-2）333株来源于中国协和医科大学，Vero细胞中传代，毒种保存于-70℃。 1.3 病毒滴度的测定 以TCID50表示病毒毒力。取上述制备好的毒株，做10倍系列稀释，10-1至10-10。将各稀释度的毒株接种于Vero细胞，各6复孔，同时设阴性对照。37℃培养3天后，观察细胞病变，以出现细胞病变的最高稀释倍数的倒数作为TCID50。 1.4 原位杂交检测HSV-2糖蛋白gB mRNA的表达 1.4.1 探针的设计［7，8］ 根据Gen Bank中HSV-2 全基因序列，设计对应于HSV-2糖蛋白gB基因序列的寡核苷酸探针序列为5’-ggcgactttgtgtacatgtccccgt