使用INCellAnalyzer1000进行神经上皮.PDF

GE Healthcare Life Sciences Application Note IN Cell Analyzer 1000 使用IN Cell Analyzer 1000进行神经上皮 细胞分化的群体分析 前言 样本及试剂 IN Cell A nalyzer 1000是为了实现下述高内涵分析的目标 •源于小鼠14.5 日胎仔终脑的神经上皮细胞 而开发的系统：对于活细胞、固定细胞能够迅速而简便地 •DMEM/ F- 12 （Sigma公司、D2906 ）+ N2 supplement + 进行多色荧光成像；将根据图像而获得的生物化学信息迅 bFGF, EGF （各10ng/ ml ） 速进行数值化。近些年，通过提高分析软件的功能，对于 •Hoechst 33258 （Invit rogen 公司、H1398 ） 原来通过流式细胞仪进行的群体分析，也可以使用高内涵 •小鼠Anti-MA P2单克隆抗体 （Sigma公司、M4403 ） 分析来完成。由于成像基于荧光显微镜，贴壁细胞不需要 •Fluorescein （FITC ）AffiniPure Donkey Anti Mouse IgG （ 从微孔板中消化分离出来，可以对有限的细胞在原位进行 H+ L） （Jackson ImmunoResearch Laboratories公司、 快速分析。 715-095-151） 本文是高内涵分析方法进行群体分析的一个实例。通过 •多克隆兔抗胶质纤维酸性蛋白质 （G FA P ） （Da ko 公 对源于小鼠胎儿的神经上皮细胞施加LIF （白血病抑制因 司、Z0334 ） 子）、化学制品X ，评价药物的诱导分化效果。 •Cy3标记驴抗兔IgG （Millipore公司、A P182C ） 实验内容 将源于小鼠14.5 日胎仔终脑的神经上皮细胞用N2 supple- ment 、bFGF及EGF （各10ng/ ml ）的DMEM/ F- 12培养基进 使用的产品 行培养后，按照LIF （白血病抑制因子）、化学制品X 、 •IN Cell Analyzer 1000 2.5ng/ ml LIF+化学制品X等3项条件，处理2天时间。 （图 •IN Cell Investigator Software 1） •图像数值化：Developer toolbox 细胞固定后，1/ 2 0 0 稀释抗- MA P 2抗体及1/ 10 0 0 稀释 •数值图形化：Spotofire DecisionSite 抗-G FA P抗体用作一抗，1/ 200稀释FITC标记抗体及1/400 稀释Cy 3 标记抗体用作二抗，进行免疫染色。I N C e l l A na lyz e r 1000进行图像读取后，通过图像分析软件对样 品进行分析。 （图2-4 ） 71-3236-11 1 2 3 4 5