实验土壤中产淀粉酶菌株的筛选—培训课件.ppt

生物制药学实验 实验1-5 产淀粉酶菌株的筛选及诱变系列实验 实验需知 实验分组：2个实验室，每个实验室分6组（名单上报），每次实验结束留1组同学值日 实验成绩：占期末总成绩的20%，包括实验出勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写 实验结束：将实验用品收拾整齐，由实验老师确认实验结束后方可离开 实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤（注意事项）、实验结果、思考题 系列实验内容 实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选 （1、2） 实验2 产淀粉酶菌株的诱变剂量选择 实验3 紫外诱变剂突变菌株的初筛 实验4 紫外诱变剂突变菌株的复筛 实验5 高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶活力测定 背景知识 淀粉酶（amylase, Amy, AMS ）： 能水解淀粉、糖原和有关多糖中的O-葡萄糖键的酶 药物：助消化药，治疗功能性消化不良 背景知识 产淀粉酶微生物：细菌、真菌等 菌种分离与筛选步骤： 采样——培养——分离——筛选 诱变育种步骤： 诱变——初筛——复筛——性能检测 背景知识 实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1） 实验目的 掌握菌种分离与筛选的方法 从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物 实验原理 自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够合成分泌淀粉酶。 当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、聚糖和单糖。这些水解产物不能与碘作用，从而在菌体周围形成透明圈。 实验步骤 1. 筛选培养基的配制（已完成） 可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，琼脂20 g，水1000 mL。 2. 倒平板（每组6个，每个平板10mL左右） 实验步骤 3. 土样的采集 各实验室分别取三种不同环境的土样并记录当时取样环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同一个地方进行取样），通常取离地面5～15cm处的土壤。 4. 稀释分离 取土样1 g，加入9 mL无菌水，逐步稀释至105、106、107 （单数组）或106、107、108（双数组） ，每个梯度涂2个平板。 10ml 1g 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 10-1 10-2 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 稀 释 1ml 分离 实验步骤 5.各组做好标记，置于30 ℃恒温培养48 h（倒置培养？？） 6. 产淀粉酶菌株的鉴定（下次课） 6. 产淀粉酶菌株的鉴定 倒平皿（注意培养基状态、体积、表面平整）：3个 用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（点植法：用接种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔按对应顺序对各单菌落进行标号。 在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录有水解圈的单菌落，与此对应找出合成淀粉酶的菌株1-2株。 注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（实验报告中注明使用哪一组的菌落）。 7. 产淀粉酶菌株的增殖培养 液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应1瓶（每组1-2瓶，参考鉴定结果） 液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上沾取少许菌苔，将接种环在液体培养基内振摇几次即可。 做好标记，放入摇床中振荡培养24h。 8. 产淀粉酶菌株的纯化——平板划线法 灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔 左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种环伸入皿中，划3-4条平行线 灼烧接种环，60°旋转平皿，划线（注意：后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起） 灼烧接种环，将划线平板倒置，于30℃培养48h后观察。 实验结果及分析 1. 取样环境情况 2. 记录产淀粉酶菌株数量（比透明圈？？）及对菌落的初步鉴定结果 3. 分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差异？可以初步得出什么样的结论？（未分离出菌株的原因？） 细菌菌落特征 较湿润、光滑、透明、易挑取 菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致 质地均匀、小而突起（或大而平坦） 有臭味或酸败味 酵母菌菌落特征（与细菌相似)? 圆形或卵圆形 较湿润、较粘稠、光滑，易挑取 菌落质地均匀 正反面、边缘和中心颜色一致 比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色 多带酒香味 霉菌菌落特点 大而疏松，呈绒毛状（曲霉）、絮状（毛霉）、地毯状（青霉）或蜘蛛网状（根霉） 有的无固定大小，延至整个培养基中 产色素，使菌落显色 放线菌菌落特征 干燥、不透明，小而紧密，呈放射状 菌落初期表面光滑或呈致密的丝绒状，当产生孢子之后，其菌落表面呈粉状、颗粒状 菌落和培养基连接紧密，难以挑取，或者整个菌落被挑起而不致破碎 菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致 带有泥