植化方法学 2005.pptVIP

植化方法学涉及内容 如何开展研究-注意点 查阅文献，了解研究现状 1）、同种同属植物的相关文献 2）、某类成分的相关文献 根据不同目的，确定实验方案 1）、化学成分系统研究 2）、某类化学成分的分离 3）、某种已知化学成分的分离 4）、活性成分的追踪分离 预试或小试 1）、含有化学成分性质和类别 2）、为放大试验而进行的小试 鉴定化合物纯度的方法 1、熔点测定法 2、薄层色谱法 3、高效液相色谱法 4、核磁共振法 4、电泳法 HPLC结合TLC鉴定样品纯度实例 核磁共振法判断样品纯度 核磁共振法判断样品纯度 二、氧化铝相关色谱 1、层析色谱用氧化铝规格和种类 薄层：200~300目 柱层：60~100目，100~200目 1)、碱性氧化铝：pH9~10，直接由氢氧化铝高温脱水制得。适用于对碱溶液比较稳定的中性色素、甾族化合物、生物碱、醇以及其它中性、碱性物质的分离。 2)、中性氧化铝：可由碱性氧化铝水洗至pH~7.5，经活化制得。中性氧化铝使用最广，适于醛、酮、醌、某些苷及酸碱溶液中不稳定的化合物如酯、内酯等化合物的分离。 3)、酸性氧化铝：加入2N盐酸处理，使水提液的pH为4~4.5，经活化制得。适用于酸性色素及某些醛酸的分离。 2、氧化铝的含水量与活性 3、氧化铝活性的测定 细玻璃管法（展开剂：苯） 4、氧化铝的再生 用甲醇、稀醋酸、氢氧化钠溶液及水洗涤，再经高温活化后，可重复使用。 5、氧化铝应用的局限性 一些酚性化合物（部分黄酮、香豆素类）、酸性物质（部分三萜酸）能与氧化铝结合。此外，层析过程中引起的异构化、氧化、皂化、水合，以及脱氯化氢形成双键等反应，应引起操作者的注意。 三、聚酰胺相关柱色谱 1、聚酰胺的结构 常用有锦纶6(聚己内酰胺)和锦纶66(聚己二酰己二胺) 2、聚酰胺的分离原理 1) 反相色谱（流动相：含水溶剂）： a、氢键吸附：聚酰胺分子内的酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而产生吸附作用。 b、非极性固定相：聚酰胺非极性脂肪链。 2) 正相色谱（流动相：有机溶剂）： 极性小的化合物先被洗脱下来，表现在薄层色谱上比移值较大。 3、聚酰胺适用范围 黄酮、酚类、蒽醌类、萜类、甾体、生物碱、糖类等物质的分离；去鞣质。 4、聚酰胺的规格 柱色谱聚酰胺 20~40目，60~100目，100~200目 薄层色谱聚酰胺 200~300目 5、聚酰胺粉的预处理 聚酰胺粉（锦纶）中常有两种杂质：原料单体、小分子聚合物和蜡质，在使用前需要预处理。 操作方法： 1)、以90%~95%的乙醇浸泡，搅拌，除去气泡后装入柱中，用醇洗至洗液透明并在蒸干后无残渣或极少量，一般至少洗脱3~4倍的体积。 2)、依次用2~3倍体积的5%NaOH水溶液、2倍体积的蒸馏水、2~3倍体积的10%醋酸水溶液洗涤，最后用蒸馏水洗至中性。 6、聚酰胺柱色谱操作 装柱：以含水溶剂系统为洗脱剂，常以水装柱（反相色谱）；若以有机溶剂系统为洗脱剂，常以极性较小的起始溶剂装柱（正相色谱）。 加样：100ml的聚酰胺可吸附1.5~2.5g。干法上样可参照硅胶柱色谱；湿法上样多用于反相色谱，样品溶于或至少均匀分散在水溶液中。 洗脱：根据聚酰胺薄层色谱结果确定柱色谱的条件。反相色谱一般用水、稀至浓的乙醇；正相色谱一般用氯仿、氯仿-甲醇的混合溶剂。 再生：5%NaOH洗涤至溶液颜色变淡，然后蒸馏水洗至pH8~9，再以2倍量10%醋酸洗脱，最后以蒸馏水洗至中性。 * * 植化方法学(一) 天然药物化学教研室 邱 峰 2005年 3月 药材 提取物 单体化合物 结构鉴定 分离 化学及波谱学 提取 植化方法学（一） （各种色谱的分离原理及操作） 一、硅胶相关色谱 二、氧化铝相关色谱 三、聚酰胺柱色谱 四、葡聚糖凝胶柱色谱 五、大孔吸附柱色谱 六、离子交换柱色谱 七、反应薄层色谱 八、提取方法 一、硅胶相关色谱 1、硅胶的结构(SiO2.XH2O) O—Si—O—Si—OH O O O O 植化方法学（一） （各种色谱的分离原理及操作） 一、硅胶相关色谱 二、氧化铝相关色谱 三、聚酰胺柱色谱 四、葡聚糖凝胶柱色谱 五、大孔吸附柱色谱 六、离子交换柱色谱 七、反应薄层色谱 八、提取方法 2、分离原理 吸附作用：氢键作用、偶极作用和静电作用等 吸附强度的大小取决于硅醇基类型、硅醇基数目（比表面积）、孔体积、平均孔径 3、使用范围 由于硅胶的弱酸性、往往适合于分离黄酮、香豆素、蒽醌、萜、甾体等中性或弱酸性类化合物。 黄连生物碱的化学结构 薄层板： 硅胶G薄层板， 110 ?C 活化1小时 展开剂： 乙酸乙酯-氯仿-甲醇-浓氨水-二乙胺 （8:2: