TLS法和蛋白酶K法提取DNA的比较.PDF

T 艰 白踌 K ， ^ 维普资讯 。36。。 中华 医学遗传 学杂表1992年第 9 p一了}J， 褊 ＼ TLS法和蛋 白酶K法提取DNA 的比较 阿济医科大学基础医学部生化教研室 壁—主 三 丝 何善述 R f - 在将基周分析方法用于诊斯各种遗传病 的过程中， 后进行A幽r0se凝胶 电泳[7)， 以ADNA／I-Iind苴片 ’ 首先要进行DNA 的提取，这对于获得正确和稳定 的分 殷作为分子量标准，在紫外灯下观察结果。 析结果授为重要．最近报遭的 TLS (三乙醇胺月桂基 4．PCR。用TLS法提取的 DNA 作为模板进行 硫酸盐)法 [1]，有人认为可以代替蛋白酶K法 [2)， PcR，反应条件参闻 Zirn~ 8]的方法， 循环扶皴 但尚未丑有关这两种方法平行比较 的研究报遭。为此， 为35~40次，扩增产物用 1 Agatose凝胶电泳鉴定。 我们在 提取 DNA 时对 TLIs法与蛋 白酶 K法进行了 结 果 韧步比较，发现前法优于后法，值得推广应用． 一 二法提取DNA量 的比较 、 材料与方法 TLS法和蛋 白醇K法提取 白细胞DNA量 分品Il为 一 、 样 品和试剂 45or+g／l0 白细胞 (附表第 2， 4行 )和2oo~g／Io。自 血液样品取 白正常献血者 (O．2 EDTA 生理盐水 细胞 (附表第 6，7行)，前法的得蠡比后法高 1倍 抗凝)，绒毛组织取 自人工 流 产 样 品。TLS和Taq 多。从绒毛组织提取的DNA量，二法结果一致 (附表 DNA 聚合酶购 白协和医太基础部友谊医学科技公司． 第 5， 8行)。如果采用TLS法直接 占L垒 血 中提 取 蛋 白酶K为 Mezck公司产品．RNA酶，限制性内蜘酶 DNA，尉比先将 白细胞分离后获得的更多 (附表第1， 购 白华美生物工程公司。PCR 弓物【由山东省基础 医学 2项)。但是，从垒血 中提I~DNA 后，如果经过RNA 科学院合成。 酶处理，砌其DNA丢失很多 (附表第 8， 4项)。 = 、方法 耐寰 两种方法从垒血、白细胞和绒毛提取 1．TL$法提取DNA，(1)垒血 DNA 的提取方 法参照文献[1]，唯将 DNA 丝状纤维沉淀的离心收集 DNA 置柏比较 改用毛细浦管吸出，以避免RNA 的污染，从而省去了 RNA 酶消化步骤J (2)白细胞DNA 的提取 将 5ml 垒血小心倾注在等体积 的淋 巴细胞分层液 上，2000~ 3000r／min离心20分钟，收集 白细胞层．胃0。9 生理 盐东洗涤 2攻，加 入 50O 1TES (15mmol／L啊 s— ttCIpH8。0， 15ramol／LEDTA pH 8．0，15ram0】 ，LNaCI)，充分混悬 白细胞，再加入 1001TLS(1) 克分涡匀后置室温 2小耐， 以后的提取过程同 (1)j