水稻叶片中可溶性蛋白质提取介质的比较.PDF

杭州师范学院学报(自然科学版) Vo l. 3 No. 1 第 3 卷第 1 期 2004 年 1 月 Journal 01 Hangzhou Teachers College(Natural Science Edition) ]an. 2004 文章编号: 1008- 9403 (2004) 01- 0034 一03 水稻叶片中可溶性蛋白质提取介质的比较 应奇才1 ， 2 ，钟国庆1 ，邱 明I 1.杭州师范学院生化与分子生物学重点实验室，浙江杭州 310012:2. 杭州师范学院医学院.浙江杭州 310012) 摘 要z 对影响紫外测定可溶性蛋白质含量的二个因素(叶绿素和石英砂)以及水稻叶片可溶性蛋白质的 4 种提取介质进行了比较分析，结果表明:叶绿素和石英砂对紫外测定可溶性蛋白质含量有明显影响.用 O. 1mol/L pH6. 8 TrÎs-HCl 缓冲液提取的可溶性蛋白质得率最高. 关键询:可溶性蛋白质;含量测定;提取 中图分类号: Q945. 12 文献标识码:A 目前，从植物组织(根、茎、叶)内提取可洛性蛋白质的提取液有重蒸水[1] 、 O. 05mol/L pH7. 0 的 PBS[2J 、 O. 1mol/L pH6. 8 Tris HCl 缓冲液[3J 及 O. 1mol/L pH8. 0 Tris-HCl 缓冲液ltl 蛋白质的定量测定 主要有紫外分光光度法、考马斯亮蓝 G-250 比色法、Follin←酣法及双缩服法rs. o. 71 笔者在实验过程中发现 用不同的提取液提取的可溶性蛋白质得率各不相同，在使用紫外分光光度法测定可溶性蛋白质时，提取过 程中使用的石英砂及叶片组织中存在的叶绿素对测定结果有一定的影响，在此，用水稻叶片做材料，对这 些问题进行研究.结果报道如下. 1 材料和方法 1. 1 材料 水稻(οryza Satiω L.)品种为秀水 11 ，测试材料为三叶期的叶片- 1. 2 试剂及仪器 Tris 、浓盐酸、氧化锅、石英砂、磷酸氢二纳、磷酸二氢铀、氧化押都为分析纯试剂 ;UV-2401 紫外分光 光度计. 1. 3 实验方法 1. 3. 1 叶绿素以及提取过程中石英砂的使用对可溶性蛋白质紫外测定的影响 提取叶绿素后，用 PBS 提取的方法:称取 0.2 g 叶片组织，用蒸馆水洗 2 次后，用 80%丙酣提取叶绿 素 24 h ，再依次用蒸馆水洗净叶片，用滤纸吸干表面水分，加 0.05 mol/L pH7. 0 的 PBS3 ml 、少量石英砂 (约 0.6 g) 充分研磨后，4000 rpm/min 离心 5 min ，收集上清液，将沉淀重新悬浮、研磨、离心 2 次，合并 3 次主清液，定容至 10 ml ，以 0.05 mo l/L pH7. 0 的 PBS 调零，测定 260 nm 和 280 nm 处的光密度值，利用 收稿日期:2003-09-27 基金项目·浙江省自然科学基金(编号:3(206 1) .中国水稻科学发展基金(编号 :0003239). f乍者简介:应奇才1965 一).男，浙江永康人，杭州师范学院医学院高级实验师，主要从事生物化学与分子生物学研究. 应奇才，等:水稻叶片中可溶性蛋白质提取介质的比较 第 1 期 35 经验公式计算出蛋白质浓度和每克鲜叶中的可榕性蛋白含量. 不提取叶绿素，直接用 PBS 提取的方法简称 PBS 提取的方法:基本同提取叶绿素后，用 PBS 提取的 方法仅少一步用 80%丙酬提取叶绿素 24 h. 于1. 英砂空白:用 0.05 mol/L pH7. 。的 PBS3ml 、少量石英砂CO. 6 g) 充分研磨后，4000 rpm/min 离心 5 mln ，收集上清液，将沉淀重新悬浮、研磨、离心 2 次，合并 3 次上清液，定容至 10 时，以 0.05 mol/L pH7. 0 的 PBS 调零，测定 260 nm