牛血清白蛋白与锚天青S作用机理的研究.PDF

化学学报 A口:A. CIDMlCA SINICA 1饵~， 57， 389-395 -翩. 牛血清白蛋白与锚天青 S 作用机理的研究 马春琪 李克安 赵凤林 童沈阳 , (北京大学化学与分子工程学院北京 1则71) 摘要 用三种不同方法相互对照，求出了锵天青 S 与牛血清白蛋白的结合常数和结合个数，提出了 蛋白质等电点前后或不同锵天青S 浓度下，两者存在不同的结合模式.利用 Forster 非辐射能量转移 理论确定了铭天青S 在牛血清白蛋白上的结合位置，利用铅天青 S 对 BSA 的荧光猝灭，对两者的作 用机理作了初步探讨. 、 关键词 铭天青 S ，牛血清白蛋白，作用机理 锚天青 S(缩写为 CAS) 是三苯甲烧类染料，具有一个磺酸基，在酸性条件下可与蛋白质结 鸡届- 合，其颜色由红色变为紫红色，巳用于蛋白质的可见分光光度探针[IJ 与荧光探针[2J 测定.本文 用三种不同方法相互对照，求出了锚天青 S 与牛血清白蛋白的结合常数和结合个数，提出了蛋 白质等电点前后或不同锚天青S 浓度下，两者存在不同的结合模式.利用 Forster 非辐射能量转 移理论确定了锦天青S 在牛血清白蛋白上的结合位置，利用锚天青S 对BSA 的荧光猝灭，对作 驰、飞毛。 用机理作了初步探讨. 1 实验 - 1. 1 仪器和试剂 缉h • UV - 265 型紫外-可见分光光度计(岛津); DU - 7 型紫外-可见分光光度计 (BECKMAN);RF - 540 型荧光分光光度计(岛津); Model- 821 型酸度计(中山大学) . CAS( Baker Grade) :准确称取 O.1513g 试剂，榕于适量水中，并转移至 250mL容量瓶中定 3 容，浓度为1.∞x 1O- moνL，使用时适当稀释.牛血清白蛋白(BSA) 由 Sigma 公司生产，以二次 去离子水配成浓度 6.8 mgImL的溶液.pH 由 Britton - Robinson 缓冲溶液控制.所有试剂均为分 析纯，实验用水均为二次去离子水. 1.2 实验步骤 气 ,. 在lOmL比色管中，分别加入缓冲榕液、CAS 及 BSA 溶液，以水定容，摇匀，静置 10 min ，在 选定波长下测其吸光度或荧光强度，液池 lcm. 夺 也 、 、‘飞 1.3 摩尔眼光系数的测定 1.3.1 CAS 的摩尔吸尤系数(e:F) 根据朗伯-比尔定律，以吸光度对 CAS 浓度作图，所得直 线斜率即为 εF 海男，53 岁，教授 收稿日期: 1997 - 12 - 08 ，修回日期:1998-07-20，国家自然科学基金(2岁77筑汩的及高等学校博士学科点专项基