阪崎肠杆菌的测定课件.pptxVIP

阪崎肠杆菌的检测GB4789.40-2010 讲解人：冷静 阪崎肠杆菌的概述 1961 ——英国2例产黄色素阴沟肠杆菌(阪崎肠杆菌)致新生儿脑膜炎 1980 ——将产黄色素的阴沟肠杆菌重新分类命名为阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii） 2002年，国际食品微生物学规格委员会（ICMSF）将阪崎肠杆菌归类为“对特殊人群具有严重危害，威胁生命或者产生器质性慢性后遗症、长期影响”的微生物 2004年2月，WHO/FAO就婴儿配方奶粉含阪崎肠杆菌课题共同召开专家会议，做了初步的危险评估，将阪崎肠杆菌归类于“A”类微生物，与严重的沙门氏菌相提并论 2004年3月，CAC食品卫生委员会（CCFH）同意尽快进行修订婴幼儿食品卫生操作国际标准，包括阪崎肠杆菌及相关微生物的微生物学标准 阪崎肠杆菌的分布 1.环境 原油、切削液、苍蝇、食品加工厂（奶制品、谷类、巧克力、马铃薯粉），医院（空气、听诊器、临床食品）、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤 2.食品及相关用品 啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉冲调用品（搅拌器、勺子、甁刷），普通奶粉、碎牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水（管道、生物膜）、调味品 婴儿配方粉中的污染状况 公共卫生关注的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的来源包括以下2种情况： 内在污染—二次污染 如：加工环境中微生物的存在；加工装置的表面微生物的存在，热处理后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物。 外源性污染—配方粉中调制环境和调制器皿 受阪崎污染的配方粉或调制配方在较高温度下存放，食用前不加热或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎有机会生长繁殖，增加患病的危险性。 阪崎肠杆菌的危害 婴儿： 1. 脑膜炎 2. 坏死性小肠结肠炎 3. 菌血症 • 严重的神经系统后遗症 成人：局部感染、菌血症、术后骨髓炎 阪崎肠杆菌的生物学特征 1、G－，周身鞭毛，兼性厌氧 2、肠杆菌科克罗诺杆菌属 3、在6℃~47℃范围内均可生长，最适35℃~37℃ 4、平均繁殖时间在23℃为40min，10℃为4.98h，冷藏条件下可以生长 5、在TSA培养基上产生黄色色素 6、产生α-葡萄糖苷酶，其它肠杆菌均不产生； 7、较强的耐干燥性，耐高渗透压， “干燥逆境抗性”比其他，大多数乳品中分离得到的肠杆菌更加耐热，但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭 易感人群 • 阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但从报道病例的年龄分布来看，高危人群主要是婴儿（即＜1岁的儿童），新生儿（≤28天）、尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴儿，发生严重感染的危险性最高。 • 母亲HIV阳性的婴儿 主要感染渠道 虽然现在还不能确定阪 崎肠杆菌的宿主和传播 模型，但在多起新生儿 阪崎肠杆菌感染事件的 调查中发现婴幼儿配方 粉是主要的感染渠道 阪崎检测步骤 1前增菌 2选择性增菌 3平板分离 4平板确认 5 生化鉴定 阪崎肠杆菌检验——前增菌 操作：100g样品+900mL增菌液，培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用：营养丰富，更利于食品检验具有缓冲体系 未混匀 混合均匀 阪崎肠杆菌检验——选择性增菌增菌 操作：1ml样液+10mL增菌液， 44℃±0.5℃培养24h±2h 培养基的作用 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨加万古霉素增菌液(mLST-Vm)， Vm有效抑制G+，同时能在高温下长的更好。而较高温度可以抑制其他细菌生长 mLST含盐高，利于筛选高渗透压的阪崎 因前增菌优化，仅使用1mL前增菌液即可 注： mLST-Vm，灭菌后使用前加Vm，放置不超24h 要求44℃培养，温度波动＜0.5℃ 阪崎肠杆菌检验——平板分离 操作：各取培养物一环，接种显色平板，培养24h±2h 培养基作用 显色培养基 •显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理，分解底物形成蓝绿色菌落，选择性极佳 阪崎显色培养基 阪崎肠杆菌检验——平板确认 操作： 挑取1~5个典型或疑似菌落，划线于胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）25℃±1℃培养 在TSA培养基上产生黄色色素 生化鉴定（API20E） 步骤一 步骤二 步骤三 生化鉴定（API20E） 培训结束 Thank You