五种商品化肺炎支原体试剂的比较.doc

Ann Biol Clin（1992） 50.593-597 Elsevier. Paris 原文 五种商品化试剂盒评估：补体结合试验、 微型颗粒凝集试验、间接免疫荧光试验、 酶联免疫试验和乳胶凝集试验， 与免疫印迹法比较肺炎支原体血清学 G Aubert，B Pozzetto，OG Gaudin，J Hafid AD Mbida，A Ros 法国Cedex2，Saint-Etienne 42032，ruc Ambroise-Pare 15 Saint-Etienne大学Jacques-Lisfranc医学系 细菌学及病毒学实验室 （稿至日期：1992年2月10日；接受日期：1992年6月10日） 摘要：一组68份血清样品采集自41个试验志愿者。当用免疫印迹法检测180kDa蛋白时，这些试验志愿者显示出不同的肺炎支原体免疫学图象。本研究使用这68份样品来评估5种商品化试验，这5种试验分别基于不同的方法：补体结合试验（CFT）、微型颗粒凝集法（MAG）、间接免疫荧光法（IFA）、酶联免疫法（ELISA）和乳胶凝集法（LA）。这些试验都分别按照各自的生产商提供的使用说明书进行操作。对于肺炎支原体的免疫性判定来说，5种试验都与免疫印迹法相符得很好：5种试验的敏感性均为100%。特异性从95.6%（MAG）到82.6%（ELISA）不等，总体符合率从98.2%（MAG）到92.8%（ELISA）不等。比较4种定量试验（CFT、MAG、IFA和ELISA）抗体滴度，得到的相关系数从0.87（CFT-IFA）至0.67（CFT-ELISA）不等。免疫印迹法图象所显示6例显著抗体升高，除了有一例未被ELISA方法检出外，其它均被所有试验检出。总体而言，在对肺炎支原体免疫状态的常规判定中，这些商品化试剂盒能提供令人满意的结果：其中CFT最便宜，而MAG和LA最易于操作。 肺炎支原体 / 血清学 / 免疫印迹法 / 抗体 简介 肺炎支原体是一种常见的人类病原体，引起广谱的疾病，包括呼吸道和呼吸道外症状，即神经性感染，有可能造成生命危险[1，2]。培养肺炎支原体是一项繁琐而费时的工作，而通过杂交[3，7]和聚合酶链式反应[8]来检测细菌基因组虽然是非常有希望的方法，但现在还处于开发阶段。因此，对肺炎支原体感染的生物学诊断仍然要以血清学方法为主。 虽然补体结合试验（CFT）是最常用的常规试验，但是还有大量的方法可以使用，例如补体介导杀伤试验[10]、放射免疫沉淀试验[11]、间接红细胞凝集（IFA）[14]，酶联免疫试验（ELISA）[15-17]和粘着抑制试验[18]。其中一些已开发出商品化试剂盒。 有证据显示一种分子量为160~190kDa（在我们这里是180kDa）的肺炎支原体表面蛋白（起到粘素的作用）在肺炎支原体感染患者体内会连续激发特异性抗体的生成。它是免疫印迹法[21，22]和ELISA方法[21，23，24]的判定对象。 参考免疫印迹法对该蛋白的检出结果，我们对5种商品化试剂盒进行了评估。评估中共使用了来自41个试验志愿者的一组68份血清样品，这些试验志愿者显示出不同的肺炎支原体免疫学图象。 材料和方法 试验志愿者和血清 来自41个试验志愿者的68份血清样品（15岁以下儿童34个；成年人7个；女性18个；男性23个。平均年龄：9.5岁。年龄范围：10个月~50岁）是基于不同的肺炎支原体免疫学图象回顾性选出的，而肺炎支原体免疫学图象是按照免疫印迹法p180检测结果得出的。血清样品被分成3组：1）来自17个人的33份p180阳性血清（在该组中，当同一个患者有多份/2~6份血清接受检测时，p180印迹图象强度大体上相同）；2）来自18个人的23份p180阴性血清；3）来自6位患者的12份成对血清，它们的免疫印迹p180带强度有显著变化：4位患者从无到有；2位患者从弱到强。这6例情况被认为是出现了肺炎支原体血清转化现象。 免疫印迹法 37℃在SP4培养基[25]上培养肺炎支原体C200株7天。在PBS中洗3次并且进行了超声波降解后，使用不连续Laemmli系统[26]在7.5%聚丙烯酰胺凝胶上分离最终抗原。按照Towbin技术[27]，将该蛋白从凝胶上电转移到聚偏二氟乙烯薄膜（美国Millipore公司ImmobilonR）上。转移后，将膜切成3~4mm宽的条，在纯甲醇中浸泡几秒钟，然后在含有5%（w/v）撇脂牛奶的10mM Tris盐水缓冲液中37℃预温育1小时。将这些印迹与用同样缓冲液1:10稀释过的血清样品在37℃混合温育3小