第1章植组织培养实验室的构建和操作技术.ppt

第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术 本章教学目的与要求： (1)掌握组织培养实验室的设计； (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法； (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 (4)掌握灭菌和消毒的区别； (5)掌握灭菌的不同方法和具体操作过程； (6)掌握无菌接种的步骤； (7)掌握外植体的培养方法和步骤； (8)一般掌握外植体褐变和玻璃化的处理方法； (9)掌握试管苗驯化的基本程序； 第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术 第一节 商业性组织培养实验室和小工厂的 设计与主要设备 二、仪器设备和器皿用具 1、超净工作台或接种箱 2、空调 3、除湿机或加湿器 4、恒温培养箱 5、高压灭菌锅 6、冰箱 7、天平 8、显微镜 9、水浴锅 10、摇床与转床 11、蒸馏水发生器 12、酸度计 13、离心机 1、培养器皿：试管、三角瓶、培养皿、 圆形培养瓶、果酱瓶2、分注器3、离心管4、刻度移液管5、细菌过滤器6、实验器皿：量筒、烧杯、容量瓶、 试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等。 1、镊子：尖头镊子、枪形镊子 2、剪子 3、解剖刀 4、接种针 5、钻孔器 第二节 培养基及其配制 一、培养基的成分 1、无机营养元素(inorganic element) 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 [N、P、K、Mg、S和Ca等]。 2、有机化合物(organic compound) 在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 种类：VBl(盐酸硫胺素)、 VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、 Vc（抗坏血酸）、 VH(生物素)、 VB11(叶酸)、 VB12（钴胺素)等。 使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L， 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 使用浓度：为10—200mg／L。 3、有机附加物 （天然复合物） 4、植物生长调节物质(hormone) *作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。 在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5—10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。 吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸：NAA（naphthalene acetic acid） 吲哚丁酸：IBA（indolebutyri acid） 2,4-二氯苯氧乙酸：2,4—D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) 生长素作用强弱顺序： 种类： 6—BA(6—苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) 细胞分裂素作用强弱顺序 GA3（赤霉酸）： 作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。 赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。 5、培养材料的支持物 ---琼脂(agar) 固体培养时最好的固化剂。 用量：6—10g／L。 琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40 ℃即凝固为固体状凝胶。 琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。 固体培养基的特点（与液体培养基相比）: 6、抗生物质(antibiotic) 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等。 浓度：5—20mg/L。 作用：可防止菌类污染。 7、活性炭(active carbon) 目的：是利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响；利于生根。 使用浓度：1—5g／L。 它的颗粒大小决定着吸附能力：粒度越小，吸附