BD流式细胞分选仪原理和应用.pdf

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BD流式细胞分选仪原理和应用

流式细胞分选仪原理和应用 分选流式基本原理 分选流式两种激发方式 细胞激发方式 石英杯激发:光路固定。 空气激发:光路不固定。 分选流式应用 • 免疫学 高速平台分选流式基本要求: • 血液学 分选速度快; • 肿瘤学 分选活性、纯度、得率高; • 干细胞 • 神经生物学 光路固定,无需调光路; • 信号传导 采用全自动化dropdelay计算方法。 • 生殖发育 • 染色体/精子分选 • 植物学 、、、、 分选流式定律:分选速度、得率和纯度相互制约 分选速度 分选纯度 分选得率 Aria在这三个方面达到最佳的一个平衡 1. 分选速度 分选速度:振荡频率、鞘液压力和喷嘴大小有关。 分选速度和样本浓度、振荡频率、鞘液压力成正比,与喷嘴大小成反 比。现在国内用户用的喷嘴大小只有70um-100um,在这两种喷嘴使 用条件下,70um喷嘴对应:鞘液压力都是在60-70psi,振荡频率90- 100KHz;100um喷嘴对应:鞘液压力在25psi左右,振荡频率在 40KHz左右,所以说在实际使用中,对用户真正有意义的喷嘴大小 70um-100um的喷嘴,振荡频率低于100KHz,鞘液压力低于70psi。 在所有实际分选中,分选速度一般不超出20000细胞/秒。 2. 分选得率、纯度和活性高 分选得率:目的细胞的百分比、分选速度、分选纯度成反比 。 分选纯度 • 1. 液滴延迟 • 2. 液滴分析精度 • 3. 分选速度 • 4. 液流稳定性(石英杯激发保证液流不受气流和温度变 化而变化,是最稳定的) 分选调试的方便性、灵活性 细胞被检测至包含该细胞的液滴被充 电偏转的时间需要精确计算,才能保 证稀有细胞的纯度和得率,这就是 drop delay。 •AccuDrop功能(BD专利), 软件自动快速精确计算液滴 延时,保证分选的纯度和得 率 最大限度的纯化细胞:最高的分选纯度(液滴32等分) Yield模式 分选活性(多种因素决定)--Aria具备最好活性 • 1. 样本准备 • 2. 鞘液压力和喷嘴大小 • 3. 管路的无菌性 • 4. 分选样本和收集样本温度控制 • 5. 分选收集时的自动减速系统 • 6. 液流的稳定性 • …. 1.免疫学:需要多激光多色分析分选,低含 量分选。 流式最初应用领域,目前和免疫相关研 究都会用到分选流式,但是其对分选流 式提出了多激光多色和分析分选速度快 的要求。 低含量信号检测:快速分析/分选

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