全自动推片染色机染色条件设计探讨.pdf

全自动推片染色机染色条件设计探讨 余珊、李晓帅、罗江卫 【摘要】 目的 对血涂片和骨髓片的染色原理及染色条件进行探讨，得出适合SC-120全自动推片染色 机的染色参数，并建立染色效果调试方法，引导临床实验室根据不同类型染色需要及各实验 室的染色质量要求优化其染色流程，提高血细胞镜检准确性。 方法 用高效液相色谱 （HPLC）方法分析多种品牌染色液的着色主要成分的含量，结合血细胞的染色原理及染色 过程，分析染料成分的差异可能导致染色效果不同。选取国内外具有代表性的两种染色方法： 瑞氏-姬姆萨和梅氏-姬姆萨，用迈瑞的SC-120全自动推片染色机进行两种方法的推片染色实 验，选取合适的临床样本在SC-120仪器上设置不同的染色参数完成推片染色，安排有镜检经 验的检验人员进行镜检，观察各染色条件下的染色效果，从而得到不同染色方法的最佳染色 条件。 结果 不同染色方法及品牌的染色液其染色的主要成分天青B和伊红Y含量差异较 大，从而导致染色效果的差异，应有针对性地选择合适的染色条件。在迈瑞SC-120全自动推 片染色机上使用瑞氏-姬姆萨染色液染色的最佳染色参数为：设置单染色方法的第三档，染 色时间为0.5+3+5min；使用梅氏-姬姆萨染色液染色疟原虫样本的最佳染色参数为：设置双 染色方法第四档，染色时间为0.5+1.5+7min ；染骨髓样本的最佳染色参数为：设置双染色方 法第五档，染色时间为0.5+1.5+7min 。 结论 不同染色方法及品牌的染色液需要设置不同 的染色参数，临床检验人员应充分考虑各种影响染色效果的因素，根据各实验室染色质量要 求制定符合自身实验室的染色方案，提高血细胞镜检的准确性。 【关键词】 天青B；伊红Y ；SC-120 全自动推片染色机；染色条件 血涂片和骨髓片染色液是由亚甲蓝和/或亚甲蓝氧化产物（天青B），和卤化荧光素（通 常为伊红B 或Y ）组成，目前临床实验室常用的染色方法有瑞氏、瑞氏-姬姆萨、梅氏-姬姆 萨等。1976 年血液学国际标准化委员会（ICSH）成立了一个染色和染色方法专家小组，该 [1] 小组负责提出血液和骨髓片罗曼诺夫斯基染色法的标准化方法 。 - 该类染色液中的伊红为钠盐，其有色部分为阴离子，呈酸性，记为E ；亚甲蓝为氯盐， + 其有色部分为阳离子，呈碱性，恰与伊红相反，记为 M 。它们与细胞内的物质具有不同的 亲和力，而使其显现出不同的色调，以利辨认。 细胞的着色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有 的化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同，细胞成分因选择性吸附其中的有色物质而着 [2] 色 。 图 1 亚甲蓝（A ）、天青B （B ）和伊红（C ）的化学结构图 图 2 染料与DNA 结合嵌入沟回中 血涂片和骨髓片染色液的主要原料是亚甲蓝和伊红Y ，但在染色过程中起主要作用的却 是亚甲蓝的氧化产物天青 B 和伊红 Y 。目前该类染色液已商品化且品牌繁多，国内的临床 实验室以瑞氏-姬姆萨染色方法为主，国外的临床实验室以梅氏-姬姆萨染色方法为主。不同 厂家生产的染色液成分有差异，我们用高效液相色谱（HPLC ）方法测试了目前国内外主要 使用的多种染色液中的天青B 及伊红Y 的含量 （见图 3