分子荧光常见的问题和讨论.doc

碳糊电极和化学修饰碳糊电极的制备及性能综述 《生物化学与生物物理进展》1979年02期李治湘 维普　/帐号：nm531密码：131420 YG-2型荧光分光光度计的试制生物化学与生物物理进展1980年 第05期林波海 仪器工作稳定性差，漂移大时，应该考虑更换光源或光电元件 岛津SPD-10Avp型紫外检测器波长不准故障的检修 1 波长不准故障的检修 在正常使用下，如果显示波长不准，根据波长自检和自校原理，故障是由光电管没有检测到亮线引起的。当显示波长不准时，应首先检查出流动相使用得是否合适，波长设定是否超出仪器的使用范围。当排除了这些人为因素后，利用仪器的自校功能进行一次波长校正（校正方法见使用说明书）。校正后如仍显示波长不准，则按面板上的Func键，把波长设定为254nm，并且使检测池充满甲醇或乙晴，查看SMPL EN（流通池）和REF EN（参比池）的吸光度值。如果流通池和参比池的值相差很大，则故障是由光栅部分污染或氘灯能量降低引起的，按面板上的VP和Func键，查看氘灯的使用时间是否超过2000小时。如果氘灯使用时间过长，即使氘灯能够正常启动，有时也发不出0nm,486nm和656nm亮线，从而引起波长不准。这时，需要更换新的氘灯。如果氘灯使用时间不长，则故障是由光栅部分引起的。 2 光栅部分的检修与调试 光栅部分主要是由M1、M2、M3、石英窗口和光栅组成的，是整个光路的核心。反射镜镜面的光洁度越高，光电池接受到的光就越强，仪器的灵敏度就越高。如果紫外光长时间故地功能照射镜面的一个地方，会在镜面上产生光斑。如果使用环境不干燥，会在镜面上生成霉斑。如果使用环境不洁净，灰尘也会对镜面造成污染。这些都将使镜面的光洁度下降，严重时会使光电池无法检测出氘灯的亮线，从而引起波长不准。　 如果故障是由石英透镜污染或光斑造成的，应该先把瞎缝从底板上卸下来，用脱脂棉或纱布沾无水乙醇反复擦洗透镜，直至擦洗干净为止，然后重新装上狭缝。如果故障是由反射镜M1、M2、M3镜面的光斑，霉斑或污染造成的，用甲醇稀释的棉胶液（化学试剂商店有卖），在有光斑、霉斑或污染的镜面上均匀地涂抹一层，待甲醇蒸发后，会在镜面膜上形成一层薄膜，这时用镊子从镜子边缘把这层薄膜慢慢取下来。用镊子取薄膜时，一定要小心，不能划伤镜面。而光栅是一个相当于1600条/mm沟槽的全息光栅，当光栅上有光斑、霉斑或污染时，不能使用棉胶液涂抹或擦拭，只能连同处理后不能恢复光洁度的反射镜M1、M2、M3一起更换。 在更换光栅部分的任何一个器件之后，都必须对光路进行调试。首先，按shift键，开启电源，待氘灯点燃后，把波长设定为0nm，然后再把模板（调试光路的专用模具）放在反射镜M1、M2、M3和光栅上，如果没有模板，可把画有一竖线的白纸放在检测池的窗口处，使竖线正好位于流通池和参比池的中间，查看0nm亮线，是否与竖线重合，如果亮线不垂直，可拧松光栅支架上的光栅固定螺丝，轻轻转动光栅的位置，使亮线垂直。如果亮线左右偏离竖线，则应调氘灯或反射镜M2的位置，使亮线与竖线重合。如果亮线不能同时照射在流通池和参比池的窗口上，应用内六角扳手调整M2上面的螺丝，使亮线同时穿过流通池和参比池窗口。调整完后，关闭电源，盖上光栅室的上盖，重新启动电源，待仪器自检后，再进行一次波长自动校正。一般情况下，只要0nm亮线调整准确，486nm、656nm亮线经过波长自动校正后，都能将波长的误差控制在±1nm以内，使仪器显示CHECK GOOD。 光路的修理和调试是一个非常细致的工作，在修理或调试时，为了避免手不小心触摸到反射镜镜面而造成新的污染，一定要带上干净的手套。特别是在调试光路时，为了减少杂散光引起的波长调试误差，最好在光线比较暗的室内调试。当需要更换光栅部分的多个器件时，最好是更换一个调试一次，调好位置的器件，在更换下一个器件时不需要在重新调试。 , 狭缝宽度在 0.5mm量级上，而可见光在 0.5um量级上，二者比 100倍，基本不用考虑衍射效应。2, 杂散光主要来源不是狭缝衍射，而是光栅的高级次、所有光学元件表面的缺陷...3，在通常的仪器中，衍射光由于不在正常光路中，是到不了样品室的。 即使有 衍射光由于杂散的原因 进入 正常光路，它的能量也应 是正常能量的 0.01%以下，对于通常只有 0.1% 精度的分光仪来说，直接忽略。