十四章细胞融合续.ppt

该研究将生物技术与育种和生产有机结合，技术路线新颖，提供的资料齐全，数据可靠，成果有很好的应用价值，达到国际先进水平，部分研究结果处于国际领先。 NOVA + SUCCARI SOMATIC HYBRID FRUIT 筛选商用品种 PINK MARSH GRAPEFRUIT + MURCOTT TANGOR SOMATIC HYBRID FRUIT Succari + Minneola somatic hybrid fruits taken on Oct 8, 2002 三、微生物原生质体融合构成新菌株 微生物原生质体的获得、纯化、培养等类似于植物原生质体。微生物原生质体融合是一种方法简单用途较广的技术，在育种中将会有更多的实际应用。 * 2-2、细胞学染色体形态和数目的比较 18条染色体 36条染色体 第七节 细胞融合技术应用举例 动物细胞融合—单克隆抗体生产 利用原生质体融合和培养技术培 育新植物 微生物原生质体融合构成新菌株 * 1972年，美国卡尔逊开发出杂种烟草。 * 1978年，德国梅歇尔斯首次将马铃薯与番茄细胞融合成功，称“泡马豆”。 * 1978年，瑞士埃勒门斯和美国柯路斯将人纤维肉瘤细胞与小鼠的畸胎瘤细胞融合后培育出含人体染色体的小鼠。 人纤维肉瘤细胞与小鼠畸胎瘤细胞融合 一、动物细胞融合—单克隆抗体生产 p261-p276 动物细胞融合是研究细胞遗传信息转移，基因在染色体上的定位以及创造新细胞株的有效途径。 动物细胞融合过程 制备单克隆抗体（McAb）过程： 动物免疫→ 细胞融合→ 选择杂交瘤→ 检测抗体→ 杂交瘤细胞的克隆化→ 冻存及单克隆抗体的大量生产 体液免疫应答 单克隆抗体制备过程示意图 杂交瘤技术过程: 免疫动物 融合细胞的制备 两种细胞杂交融合 分装培养 抗体检测 杂交瘤细胞的克隆 冻存及单克隆的大量生产 免疫动物 杂交瘤细胞的克隆 有限稀释法: 检测到有抗体产生，待到杂交瘤细胞长满小孔的1/3-1/2时，用20%BSA的HAT培养液将其稀释成5个细胞/0.2ml和1个细胞 /0.2ml，另外重新接种，每孔0.2ml，5% CO2培养箱37℃培养；检察抗体。一般情况下，一个融合的细胞株，需要作三次以上的有限稀释培养，时间在2周左右，才能得到稳定的单克隆抗体细胞株。 软琼脂法: 配制含0.5%琼脂的上述HAT培养基，用1-5个细胞/0.2ml的细胞液在培养皿中接种，5% CO2培养箱37 ℃培养。 二、利用原生质体融合和培养技术培育新植物 p109-p118 1．植物原生质体培养 植物原生质体培养的意义： ① 融合产生体细胞杂种 ② 分离或引入各种细胞器 ③ 导入外源基因 ④ 诱发突变体 ⑤ 研究细胞信息传递、能量转换、物 质运输等 ⑥ 研究细胞壁的合成机制 ⑦ 研究膜的功能与细胞膜的相互作用 ⑧ 研究核质关系 ⑨ 研究疾病与抗性机理 （1）原生质体的获得与纯化 原生质体来源: * 植物叶片 取材容易 比较容易用酶解法分离 * 植物根尖组织 可由各种植物的种子萌发后取得 * 植物花粉 产生单倍体原生质体 * 愈伤组织、悬浮培养的细胞 细胞壁容易解离 * 植物原生质体纯化的方法： 去除破碎的原生质体、末去壁的细胞、细胞器及其他碎片等杂质 (1) 沉降法 (2) 漂浮法 (3) 界面法 (1) 沉降法 原理： 利用比重原理，在具有一定渗透压的溶液中，先进行过滤（44-169μm的筛网），然后低速离心（900-4500r/min，2min)，使纯净完整的原生质体沉积于试管底部 优缺点： 比较简单 但不易除尽一些完整的细胞，或引起原生质的破碎 (2) 漂浮法 原理： 采用比原生质体比重大的高渗溶液，使原生 质体漂浮在溶液表面 优缺点： 可以得到较为纯净、完整的原生质体， 但完好的原生质体数量较少 (3) 界面法 原理： 采用两种比重不同的溶液，使原生质体处于两液相的界面之中 优缺点： 可以收到数量较大的纯净原生质体，同时避免收集过程中原生质体因相互挤压而破碎 （2）原生质体培养 ① 液体培养 分：液体浅层培养 液体悬滴培养 ② 固体平板法 ③ 双层培养法 植物体细胞杂交过程示意图 2．利用原生质体融合培育新植株 融合生物种类 细胞来源 成功年代 烟草两个种间 叶——叶