第8章制备色谱技.ppt

第7章 制备色谱技术 7.1 制备薄层色谱技术 7.2 常规柱色谱技术 7.3 加压液相色谱技术 7.1 制备薄层色谱技术 点样 样品溶液的制备 点样设备和技术 样品溶液的制备 a纯品溶解-用溶剂溶解至一定浓度 b样品的提取与净化 ① 单一溶剂提取法 ② 液液萃取法 ③ 液固萃取法—过柱子 ④ 特殊的薄层板—带浓集区的薄层板分离，得到浓集的窄带 ⑤ 衍生化作用 ⑥ 原位反应法 点样设备和技术 1）点样方式、点样量及点样设备的选择取决于分析的目的、样品溶液的浓度及被测物质的溶解度。 2）溶剂的粘度不宜过高，以便于点样，溶剂的沸点要适中，太低会改变溶液的浓度，太高不易挥发易残留导致改变展开剂的选择性，溶剂必须全部除去后方可进行展开，但避免高温加热。 点样设备和技术 点状点样 管口平整毛细管点样，样点直径不超过5 mm; d1=1-1.5 cm; d2约2 cm； 定量时用定容管点样； 展开剂 薄层色谱条件：依据被分离物质的性质（溶解度、酸碱性及极性）、吸附剂（活性、非活性）及展开剂三种因素决定。 展开剂千变万化，可以是单一溶剂、更多的是应用二元、三元或多元的混合溶剂作为展开剂。展开剂也称为溶剂系统、流动相或洗脱剂。 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 (2) 分配薄层色谱法和纸色谱法 (3) 聚酰胺薄层色谱法 (4) 离子交换薄层色谱法 (5) 凝胶薄层色谱法 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 ① 底剂：展开剂中比例较大的溶剂极性相对较小，起溶解物质和基本分离的作用。 ②调节剂：展开剂中比例较小的溶剂极性相对较大，对被分离物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上移动，可增大Rf值，但不能提高分辨率，可称为极性调节剂。 溶剂强度 (1) 吸附薄层色谱法 ③ 抑制剂：展开剂中加入少量酸、碱，可抑制某些酸碱化合物或其盐类的解离而产生斑点的脱尾，称为拖尾抑制剂。 ④其他：展开剂中有时加入丙酮等中等极性溶剂，主要是促使不相混合的溶剂混溶，并可降低展开剂的粘度，加快展速。 溶剂强度 (2) 分配薄层色谱法和纸色谱法 ①水作固定相 ②亲水有机相作固定相 ③反相分配色谱 溶剂强度 (3) 聚酰胺薄层色谱法 氢键作用 展开剂洗脱能力顺序： 水＜乙醇＜甲醇＜丙酮＜稀氢氧化铵（钠）溶液 ＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺 溶剂强度 (4) 离子交换薄层色谱法 ①缓冲溶液 ②盐溶液 ③蒸馏水 ④上述溶液加入一些有机溶剂 溶剂强度 (5) 凝胶薄层色谱法 在Sephadex-100，150，200凝胶薄层色谱板上，用磷酸缓冲液作展开剂分离蛋白 选择展开剂的方法 a）三角形法 b）点滴试验法 c）展开室法 a） 三角形法 按照展开剂、固定相及被分离物质三者的相互影响，设计了三因素的组合。 b 点滴试验法 将被分离物质的溶液间隔的点在薄层板上，待溶剂挥发后，用吸满不同展开剂的毛细管点到不同样品点的中心，借毛细管的作用，展开剂从圆心向外扩展，这样就出现了不同的圆心色谱，通过比较就可以找到最合适的展开剂和吸附剂。 7.2 常规柱色谱技术 7.3 加压液相柱色谱技术 不同制备TLC方法的比较 制备色谱技术 2-12 2-7 2-5 分离谱带数 50-500 50-300 50-150 典型上样量/mg 在线 在线 离线 组分分开方法 环形 线形 线形 分离模式 12 18 18 分离长度/cm 1-4 0.5-2 0.5-2 薄层厚度/mm 离心 加压 毛细作用 流动相迁移方法 CTLC OPLC PTLC 参数 可使用较大直径的色谱柱，更多的固定相，因此样品量可以更大； 分离速度较慢，样品可能被不可逆吸附； 不适合小颗粒的吸附剂？ 改进方法：减压、加压等 制备色谱技术 柱色谱常用固定相 (1)硅胶：官能团和分子的几何形状，对异构体的分离选择性远大于其他色谱方法。 烷基 卤素（F Cl Br I） 醚 硝基混合物 腈 叔胺 酯 酮 醛 醇 酚 伯胺 酰胺 羧酸 磺酸 掺杂硅胶：如硝酸银处理，对不饱和烃有好的分离效果。1%-10%的添加剂的水或丙酮溶液与硅胶混合，稍干后110℃干燥即可。 制备色谱技术 (2) 健合硅胶 制备色谱技术 (3) 氧化铝 碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10，常用于碳氢化合物的分离，从碳氢化合物中除去含氧化合物。 中性氧化铝：5%乙酸处理，水提取液为pH7.5，适用于醛、酮、醌、某些苷以及酸碱溶液中不稳定成分如酯、内酯等化合物的分离。 酸性氧化铝：2MHCl溶液处理，水提取液pH为4-4.5，适合于天然及合成酸性色素以及某些醛、酸的分离。 制备色谱技术 (4) 活性炭：分离水溶性物质 吸附作用在水溶液中最强，用有机