岛津液相色谱常见问题及其对策-2014-10-24.ppt

欢迎参加岛津液相维修培训班 流动相部份 流动相部份 流动问题 流动相等级 滤膜类型 溶剂的过滤 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂 脱气问题 脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 脱气目的 1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用 脱气方法 1. 超身波脱气法 2. He清除法 3. 使用氟树脂膜的减压脱气法 梯度洗脱法 梯度洗脱装置： 高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。 梯度洗脱： 优点： 可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度 梯度洗脱法的注意点 溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器） 查看空白实验的数据。 遵守分析周期。（最初的分析数据不采用） 样 品 处 理 缓冲液 选择缓冲液的步骤 1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液） 缓冲液的使用 液相色谱容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 液相色谱容易出问题的部件 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压， 使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中， 用超声波清洗 液相色谱容易出问题的部件 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗 液相色谱容易出问题的部件 故障：密封圈磨损而导致 密封不良 现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封圈 注意点： 更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （P－SET） 液相色谱容易出问题的部件 故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压 力偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清 洗 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则可能堵塞。 液相色谱容易出问题的部件 自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 液相色谱容易出问题的部件 交叉污染的原因 手动进样法 便捷的方法（不需清洗） 1.进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态 3.注入样品 4.切回到进样状态 液相色谱容易出问题的部件 操作注意点： 1）插针应插到底 2）进样应使用液相色谱专用平头进样针 3）清洗应使用专用针口清洗器 液相色谱容易出问题的部件 手动进样阀 故障：转子密封损坏 现象：漏液 原因：a 拧的太紧 b 样品太脏