6-磷酸葡萄糖异构酶检测在类风湿关节炎中的意义.doc.doc

6-磷酸葡萄糖异构酶检测在类风湿关节炎中的意义 类风湿关节炎诊断以往检测指标是靠类风湿因子（rheumatoid factor, RF），近来的抗胍氨酸环肽抗体（抗CCP抗体）已经把RA检测的敏感性和特异性有所提高，但是RA病人体内存在的多种自身抗体和很多其他生化异常，候选的抗原还有Ⅱ型还原、热休克蛋白60、角蛋白和软骨糖蛋白39等。最近发现葡萄糖-6-磷酸-异构酶（glucose-6-phosphateisomerase, GPI）rheumatoid arthritis,RA）.1 病人和临床资料 所有198例病人均来自仁济医院门诊或住院病人，其中RA病人100例，包括男性31人，女性69人。年龄最小12岁，最大68岁，平均50±12.9岁，另外有98例非RA病人作为对照，其中SLE病人32例，OA病人20例，AS病人20例，PM/DM病人14例，SS病人12例，对照组包括男性43人，女性55人，年龄最小16岁，最大67岁，平均速度8±15.9岁。所有病人均符合ACR修订的诊断分类标准。 1.2 RA病人活动的判定 判断标准：①关节肿胀≥6个；②关节压痛≥6个；③晨僵≥45分钟；④血沉（ESR）≥30mm/h；⑤C反应蛋白大于正常值上限的1.5倍。RA病人存在①+②同时伴有③、④、⑤三项的任何两项被认为活动：不同时满足①+②或③、④、⑤仅一项，认为不活动或活动度低。 2.1 检测方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测病人血液中的葡萄糖6磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase,GPI） 2.2 试验步骤 病人血清按1∶10稀释于样品稀释液中。检测时加阳性、对照阴性对照和GPI标准品（0、0.16、0.33、1.0、2.0μg/m）各100μl，37℃1小时。弃样本后PBS洗板3次，再加入酶标抗体，37℃1小时，再次FBS洗板3次，加TAB显色液100μl显色10分钟后，2M硫酸50μl终止显色，酶标仪（Hio-Rad550）490nm读板，参比波长630nm。 2.3 结果判定 实验结果根据标准品的浓度和吸光度（OD值）做直线回归，浓度为横坐标，OD值位纵坐标，尝试在2.0μg/ml为直线。根据文献0.16μg/ml以下定为正常，0.16~0.33μg/ml以内为可疑，大于0.33μg/ml为阳性。 3. 结果统计 用SAS6.12软件包，采用exact Chisque对各组数据进行卡方检验。对RA患者年龄、发病时间、肿痛数、X线分期、HAQ、VAS、RF、ESR等数据进行Logistic回归分析。 4. 实验结果 病人检测的浓度分布见图1，RA病人血清GPI浓度超时0.16μg/ml的比率是35%，阳性率为28%，对照组超过0.16μg/ml的比率是13.3%，阳性率为2%，其特异性高达97.9%，阳性预测值为93.3%。同时RA组血清GPI浓度超过计划2.0μg/ml的病人（23%）明显高于对照组对（0%）（表1）。通过对RA患者进行Logistic回归分析发现仅关节肿胀疼痛数与GPI浓度有相关性（表2）。 各组病人的GPI浓度分布 注：RA-A=RA活动组，RA-NA=RA不活动组 0.16μg/ml， 0.33μg/ml 表1：各组GPI浓度分级一览表 血清GPI浓度(μg/ml) 0.16 0.16~0.33 0.33~2 2 RA组（n=100）* 65 7 5 23RA活动组（n=65） RA不活动组（n=35） 对照组（n=98） SLE组（n=32） AS组（n=20） OA组（n=20） PM/DM组（n=14） SS组（n=12） 39 26 85 26 20 20 10 9 3 4 11 4 0 0 4 3 4 1 2 2 0 0 0 0 19 4 0 0 0 0 0 0 *RA组和对照组X2=27.824,P0.001。 表2：Logistic回归分析结果 平均年龄发病时间关节肿痛X线分明HAQ VAS ESR RF阳性率（%） （年）胀数 RA组 P值 50±12.9 0.560 10±11 0.520 12±5 0.0029▲ 2.3±1.6 0.500 23.8±8.6 0.240 6.2±3.1 0.063 63±36 0.220 64.5 0.200▲odds ratio=0.865 5.讨论 GPI又称为D-葡萄糖-6-磷酸-酮异构酶（D-glucose-6-phosphate