春柴胡中槲皮素30葡萄糖醛酸苷的单体制备与含量测定研究论文.docVIP

　　春柴胡中槲皮素30葡萄糖醛酸苷的单体制备与含量测定研究论文 .freelasil C18（4.6 mm ×250 mm, 5 μm)，流动相甲醇- 0.5%醋酸（43∶57，V/V)，检测波长365 nm。结果从春柴胡正丁醇萃取部位分离得到一化合物，鉴定为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷；槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的线性范围为4.375～140 μg·ml-1，r= 0.999 8；平均回收率为98.43%，RSD为2.26% (n=6)。结论槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷化合物系首次从该柴胡属植物中分离得到，建立的春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷高效液相色谱含量测定方法，简便、准确可靠，可用于春柴胡药材的质量控制。 【关键词】 春柴胡； 化学成分； 槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷； 高效液相 柴胡为常用的发散风热药，具有和解表里，疏肝解郁，升阳的功能，在我国已有二千多年的应用历史。《中国药典》2005年版收载的柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium ETTLER AE240分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；台式冷冻高速离心机TGLL-18K（江苏太仓华美生化仪器有限公司）BRUKER400型核磁共振仪。 甲醇为色谱纯（江苏汉邦科技有限公司），水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。 槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对照品(自行从春柴胡药材中分离、精制而得，经光谱鉴定结构，并利用面积归一化法进行纯度检查，纯度为99.5% ) 。 1.2 药材春柴胡药材采集于镇江句容地区，（见表1）。均由镇江市药品检验所张林松主任中药师鉴定，为春季采收的狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium eOH）nm: 355，258，210；ESI-MS m / z：479 ［M +H ］+ ，501 ［M +Na ］+，303 ［M +H-176 ］+，经酸水解检测到槲皮素苷元，1 HNMR (CD3OD，400 MHz)δ：δ：8.02 (1H, d, J=2.2Hz, H-2)，7.50 (1H，dd，J=8.9 and 2.2 Hz, 6-H )，6.86(1H，d，J= 9.04 Hz，5-H)，6.35 (1H，d，J= 1.48Hz，8-H)，6.17( 1H，d，J= 1.48 Hz，6-H)，5.32 ( 1H，d，J= 7.56 Hz，1″-H)，3.64 ( 1H，d，J= 9.52 Hz，5″-H)，3.48-3.60 ( 3H，m，2″，3″，4″-H) ；其理化常数和光谱学数据与文献［10］报道一致，故鉴定化合物Ⅰ为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷( quercetin-3-O-glucuronide)。 2.2 春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量测定 2.2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm) ，检测波长365 nm，柱温30℃，流速0.7 ml·min-1，流动相为甲醇- 0.5%醋酸（43∶57，V/V)，进样体积为20 μl，记录40 min。在上述色谱条件下，对照品和样品的色谱图见图1。 2.2.2 供试品溶液的制备取春柴胡药材粉末（过40目筛）1 g，精密称量，置100 ml锥形瓶中，精密加入50%乙醇50 ml，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足重量，滤过，取续滤液经0.45 μm滤膜滤过即得。 2.2.3 对照品溶液的制备精密称取在50 ℃真空干燥至恒重的槲皮素-3-O -葡萄糖醛酸苷14.0 mg，置50 ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度摇匀，即得含量为0.280 mg·ml-1的对照品储备溶液。 2.2.4 线性关系考察分别精密吸取槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对照品储备溶液，用50%乙醇稀释成浓度分别为4.375，8.75，17.5，35，70和140 μg·ml- 1的系列对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度(μg·ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y = 33 434 X -61 104，r =0.999 8，表明槲皮素-3-O-葡糖醛酸苷在4.375～140 μg·ml-1线性关系良好。 2.2.5 精密度实验 精密吸取槲皮素-3-O -葡萄糖醛酸苷对照品溶液(0.070 mg·ml-1 ) 20 μl，按上述色谱条件进样分析，连续6次，测定峰面积，其RSD为1.40% ，表明方法精密度良好。 2.2.6 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液20 μl，按上述色谱条件，分别于0，2，4，8，12，2