板蓝根高极性部位增强F022抗内毒素活性的研究论文.docVIP

　　板蓝根高极性部位增强F022抗内毒素活性的研究论文 林爱华， 刘奕明， 丘小惠， 刘云海 【关键词】 板蓝根 摘要：目的研究板蓝根高极性部位（Ftp）与板蓝根F022部位协同抗内毒素作用。方法ELISA法检测内毒素刺激鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）水平，内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验。结果Ftp联合F022处理巨噬细胞，能显著抑制TNF-α和IL-6水平，效果优于单用F022组；Ftp联用F022显著延长BCG增敏小鼠受内毒素攻击后的存活时间。结论Ftp本身抗内毒素活性较弱，但与F022部位合用.freel Radix Isatidis Abstract:ObjectiveTo study the anti-endotoxin synergistic effect of top-polar fraction (Ftp)and F022 from Radix Isatidis. MethodsThe production of TNF-α and IL-6 of murine peritoneal macrophages stimulated by LPS easured by ELISA. The lethality of BCG-primed mice ultaneously to macrophages culture 1h before addition of LPS, Production arkably inhibited. Ftpand F022 remarkably protected BCG-primed mice from LPS induced lethality.ConclusionThese results suggest that Ftp can develop the anti-endotoxin activity of F022 from Radix Isatidis. Key g/支，Sigma公司产品)；卡介苗（BCG，50mg/支，上海生物制品研究所）；TNF-α和IL-6试剂盒（北京邦定泰克生物有限公司）；新生小牛血清（NBS，批号981128，沈阳安迪生物高科技公司）。RPMI-1640细胞培养液（GIBCO公司）；0.9%氯化钠注射液（NS，批号000429，连云港制药厂）；层析硅胶（100~200目，青岛海洋化工厂）；氯仿、甲醇、石油醚等均为分析纯。 1.2 主要仪器1815TC型CO2培养箱，Shel-Lab公司产；MK3型酶标仪，Labsystem Dragon公司产。 1.3 动物C57BL/6小鼠(♀，6～8周龄，体重17~19 g)，由同济医学院器官移植研究所提供。昆明种小鼠（♂，体重18~22g），由同济医学院实验动物中心提供，均为清洁级。 1.4 Ftp、F022的提取Ftp提取板蓝根，粉碎，用石油醚回流提取3次，过滤，弃去滤液，残渣晾干；再依次用醋酸乙酯、氯仿提取；最后残渣用水提取3次，合并滤液，减压浓缩，得浸膏，收率为1.8%。F022的提取参见文献［2］。 1.5 腹腔巨噬细胞的制备及培养按文献方法［6］：取C57BL/6小鼠，腹腔注射BCG 2mg/只，4 d后拉颈处死动物，在无菌条件下注入冰冷的RPMI-1640培养液5 ml（含80 U ml-1青霉素，100 μg ml-1链霉素，10 U ml-1肝素），轻揉腹部数次，抽取腹腔液，离心，用无血清的RPMI-1640洗涤细胞2次，加入含10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液，调整细胞浓度为2×106个/ml，加入24孔培养板内，每孔1ml，置37℃,5% CO2培养箱内培养2 h后，用无血清的RPMI-1640洗去非粘附细胞，贴壁细胞即为巨噬细胞。 1.6 TNF-α和IL-6的诱生将Ftp样品液（相当于生药2.5g ml-1）、F022样品液（相当于生药2.5g ml-1）、Ftp+F022样品液及RPMI-1640各1ml分别处理巨噬细胞1h后，再加入终浓度为50ng ml-1的LPS分别培养6h和24h后，取上清液，于-20℃保存待测。 1.7 TNF-α和IL-6的定量检测ELISA法测定各标准品和样品光密度值（OD）,以各标准品浓度对OD值作标准曲线。结果表明TNF-α和IL-6浓度在0.1～10 ng ml-1范围内与OD值具有良好的线性关系。由标准曲线求算出待测样品的TNF-α和IL-6的含量，作统计学t检验。TNF-α抑制率=(对照组浓度-药物组浓度)/对照组浓度×100%。IL-6抑制率的计算方法同上。 1.8 内毒素致BCG增敏小鼠死亡实验 每只小鼠按100 mg kg-1iv给予BCG，10 d后，随机分为4组，每