染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用论文.docVIP

　　染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用论文 杨延东 高全桂 陈文芳 【摘要】 目的 探讨染料木黄酮对1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）制备的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法 将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组。用逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）技术检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）及多巴胺转运体(DAT) 基因的表达水平。应用高效液相色谱法检测纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果 MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低，染料木黄酮预处理组可逆转上述改变（F=20.31、13.19,P 0.01)。MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少，应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P 0.01)。结论 染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用。 【关键词】 帕金森病 染料木黄酮 1 甲基 4 苯基 1 2 3 6 四氢吡啶 黑质 纹状体 ［ABSTRACT］ Objective To investigate the protective effect of genistein on doparminergic neurons. Methods C57BL6 mice ly divided into three groups: control group (DMSO, ip), MPTP group (15 mg/kg, ip) and genisteinpretreatment (10 mg/kg, ip) group. The changes of tyrosine hydroxylase (TH) and dopamine transport (DAT) gene expression in substantia nigra (SN) erase chain reaction (RTPCR). The contents of DA and its metabolites dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) ined by high performance liquid chromatographyelectrical chemical detection (HPLCECD). Results Genistein pretreatment could prevent the MPTPinduced decrease of TH and DAT gene expression (F=20.31,13.19;P 0.01). MPTP significantly decreased the levels of dopamine (DA) and its metabolites dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) in the striatum, ent (F=63.58,16.12;P 0.01).Conclusion Genistein has neuroprotective effects on dopaminergic neurons against MPTPinduced mouse model of PD. ［KEY EGA公司产品；Tag DNA聚合酶为TAKARA公司产品。 1.2 实验动物造模与给药 实验动物随机分为正常对照组、MPTP模型组和染料木黄酮预处理组，每组6只。3组动物每天8：00时先行腹腔注射二甲基亚砜（DMSO)或染料木黄酮(10 mg/kg)，连续3 d；MPTP模型组于第4天注射DMSO后2 h开始腹腔注射MPTP(15 mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2 h，自第5天开始继续腹腔注射DMSO，连续4 d；染料木黄酮预处理组于第4天注射染料木黄酮后2 h开始腹腔注射MPTP(15 mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2 h，自第5天开始继续腹腔注射染料木黄酮，连续4 d。 1.3 RTPCR检测 末次注射24 h后断头取脑，快速取双侧SN，加TRIzol试剂提取总RNA。总RNA经紫外线分光光度计定量后,参照试剂盒说明书建立20 μL RT 反应体系：取3 μg总RNA加5 mmol/L MgCl2 4 μL、10×逆转录反应缓冲液2 μL，1 mmol/L dNTP各2 μL，AMV逆转录酶15 U 0.5 μL，RNase Inhibitor 0.5 μL，Olig（dT）15引物1 μL，加无RNase水至20 μL，42