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　　柴胡皂甙d对狼疮肾炎的治疗作用论文 【摘要】 目的：观察柴胡皂甙d (SSd)对NZB在肾小球的沉积也减少. 结论：SSd对NZB(μ链特异性)异硫氰酸荧光素(FITC)直接免疫荧光抗体均购自美国Sigma公司. 1.2方法 1.2.1实验动物分组将实验动物随机分为3组：SSd治疗Ⅰ组［n=8，SSd腹腔注射，剂量2 mg/(kg·d)，浓度0.2 g/L］； SSd治疗Ⅱ组［n=6，4 mg/(kg·d)，浓度0.4 g/L］；空白对照组［Ⅲ组，n=6， 腹腔注射无菌生理盐水10 mL/(kg·d)］. 于实验第6周末处死3组全部小鼠，取血及肾组织标本. 1.2.2各组小鼠血尿指标的检测实验的第2，4，6周末，收集各组小鼠尿液，用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量(mg/L)；自动生化分析仪测定血清肌酐(SCr) (μmol/L)；酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清皮质酮(CS) (nmol/L)；ELISA测定血清抗dsDNA抗体(AdsDNA) (A450 nm). 1.2.3各组小鼠肾组织学检查HE, PAS染色，光镜观察肾组织病变情况，对肾小球和肾小管损伤程度进行评分 ［3］： 每例肾组织观察20个肾小球横断面，对每个肾小球进行半定量评分. 计算受损肾小管比例(200个随机选择的肾小管中扩张、萎缩、坏死的肾小管所占的百分比). 电镜观察系膜区、内皮下、基底膜内、上皮下是否有电子致密物沉积；上皮细胞足突是否融合［4］. 免疫荧光（immunofluorescence, IF）观察肾组织IgA, IgG, IgM的沉积，根据荧光强度来判断免疫复合物的多少，选取10个肾小球用半定量法进行评分［4］. 1.2.4肾脏组织IL6和IL10 mRNA表达的检测从Nucleotide中查找小鼠IL6, IL10 和βactin基因序列，应用PrimerPremier 5.0引物设计软件，进行引物设计. ①IL6引物序列：上游5′ GTGGCTAAGGACCAAGACCA 3′，下游5′ TTCCAAGAAACCATCTGGCTA 3′；② IL10引物序列：上游5′ TCCTTGGAAAACCTCGTTTG 3′，下游5′ CTTCAATTGCTTCCCAAGGA 3′；③βactin引物序列：上游5′ GCGCTTTTGACTCAGGAT TT 3′，下游5′ CCTGGGCCATTCAGAAATTA 3′. 所有引物均由上海生物工程公司合成. 采用RTPCR和紫外图像分析技术检测小鼠肾组织IL6，IL10 mRNA表达. 实验6 in后，94℃ 30 s，56.1, 57.4,.freelin，30个循环，最后72℃延伸7 min. 取IL6，IL10 和βactin PCR产物各3 μL， 加样于20 g/L琼脂糖凝胶中进行电泳， 用凝胶成像系统定量分析DNA含量， 以所测得积分吸光度与内参照βactin积分吸光度的比值代表半定量值. 统计学处理：计量资料以x±s表示，组间比较采用方差分析，两两比较用SNKq检验(StudentNeanKeuls法). 统计结果以P 0.05为有统计学意义. 所有数据采用SPSS 13.0统计软件包处理. 2结果 2.1尿蛋白含量SSd治疗Ⅰ组和SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于空白对照组(P 0.05)； SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于Ⅰ组(P 0.05, 表1). 表1各组小鼠尿蛋白含量 2.2SCr, CS和AdsDNA水平实验6 RNA表达实验6 RNA表达水平低于空白对照组(P 0.05)；SSd治疗Ⅱ组肾组织IL6和IL10 mRNA表达水平低于SSd治疗Ⅰ组(P 0.05, 图3).A：SSd治疗Ⅰ; B：SSd治疗Ⅱ; C：空白对照. 表4各组小鼠肾组织 IgG, IgA和IgM沉积评分 3讨论 LN传统治疗方法为糖皮质激素加免疫抑制剂，常不能有效控制病情活动，而且长期大量应用上述药物可增加感染、心力衰竭、肾功能衰竭等并发症的发生. 因此，发掘新药、探索有效的治疗方法是亟待解决的问题. 柴胡皂甙是中药柴胡的主要成分之一，其最具活性的成分是SSd，很多研究表明SSd具有抗炎、免疫抑制和免疫调节作用. 早在1986年，Abe等 ［5］发现SSd可以显著减少氨基核甙肾病模型大鼠的蛋白尿. 此后陆续有学者发现SSd具有减少尿蛋白，抑制细胞增生，改善肾组织病理等作用［6-8］. 本研究结果显示，SSd能够减少NZB的沉积明显减少，表明SSd可以干扰和去除原位免疫复合物的形成，从而减轻肾脏炎症发生. 本研究还显示SSd不同程度地改善了NZBartinez MJ, Silvan Sen AM, e