栀子的化学成分及抗白血病活性研究论文.docVIP

　　栀子的化学成分及抗白血病活性研究论文 任强，孙丽华，刘新民，刘春雨，权丽辉，谢忱，廖永红 【摘要】 目的 阐明栀子Gardenia jasminoides Ellis中抗急性淋巴细胞白血病的活性成分。方法 用色谱方法分离栀子中化学成分，用波谱技术(IR.freelL。结论 化合物3具有抗急性淋巴细胞白血病的作用。 【关键词】 栀子 急性淋巴细胞白血病 活性成分 四唑盐比色法 Abstract:Objective To determine the active constituents from Gardenia jasminoides against acute lymphoblastic leukemia. Methods pounds n chromatographic techniques and their structures ined by using MTT assay．Results Eight pounds ethoxyflavone (2)，Ursolic acid (3), Dmannitol (4)，geniposide (5), deacetylasperulosidic acid methyl ester(6), genipin1βgentiobioside (7) and scandoside methyl ester (8). pound 3 exhibited inhibitory effects on leukemic cell proliferation in vitro L aginst HL60, REH and Raji cell lines, respectively．Conclusion Ursolic acid might be one of the active ingredients against anti-acute lymphoblastic leukemia conferred by Gardenia jasminoides Ellis. Key inoides Ellis；acute lymphoblastic leukemia；active constituents；MTT assay 1），5羟基7，3′，4′，5′四甲氧基黄酮（2），熊果酸（3），D甘露醇（4），栀子苷（5），去乙酰车叶草甙酸甲酯（6），京尼平1β龙胆苷（7），鸡矢藤次苷甲酯（8），其中熊果酸对白血病细胞增殖表现较强的抑制作用。 1 仪器与材料 FisherJohns熔点仪（未校正），SHIMADZU FTIR8400S红外光谱仪，Bruker AM 500型核磁共振仪， Thermo Scientific LTQ Orbitrap质谱仪，上海亚荣旋转蒸发仪RE 2000，SpectraMax 190酶标仪(美国Molecular Devices公司)，薄层板和硅胶（青岛海洋化工厂），Sephadex LH20为Pharmacia产品，其他试剂均为分析纯（MTT,美国Sigma公司）。 细胞株：HL60人早幼粒细胞白血病、REH人急性淋巴细胞白血病、Raji淋巴瘤（北京协和医学院/中国医学科学院基础医学研究所） 栀子样品于2008年3月购自北京同仁堂京北康大家园药店，经林余霖研究员鉴定为栀子Gardenia jasminoides Ellis。植物标本存放于中国医学科学院药用植物研究所标本馆，编号为R001。 2 方法 2．1 提取与分离 焦栀子（1 kg）经过粉碎，用体积分数95%乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液减压浓缩得浸膏100 g，称取硅胶(100～200目)210 g拌样，上硅胶色谱柱,用三氯甲烷甲醇（体积比100∶1～0∶100）洗脱：三氯甲烷甲醇（体积比95∶5）洗脱部分可得到化合物1（15 mg）、化合物2（6 mg）、化合物3（18 mg）；三氯甲烷甲醇（体积比9∶1～8∶2）洗脱得化合物5（1 853 mg）、化合物6（9 mg）、化合物7（8 mg）；三氯甲烷甲醇（体积比7∶3）洗脱得到化合物8（10 mg）；三氯甲烷甲醇（体积比6∶4）洗脱得到化合物4（120 mg）。 2.2 活性筛选 粗提物、各组分及化合物以二甲基亚砜（DMSO）溶解，配成50 mg·mL-1的储备液，-20 ℃保存。临用时用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养液稀释，配制所需浓度（终浓度样品中DMSO含量 0.1%）。取对数生长期的肿瘤细胞2×105个/mL，接种于96孔培养板,.freelg·mL-1）20 μL，孵育4 h后，1 000 r/min离心5 min,小心吸弃培养