树突状细胞诱导的CTLs与CIK及LAK细胞对神经胶质瘤杀伤作用比较论文.docVIP

　　树突状细胞诱导的CTLs与CIK及LAK细胞对神经胶质瘤杀伤作用比较论文 宫安静 孟庆海 朱湘华 【摘要】 目的 比较树突状细胞（DCs）诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）和淋巴细胞因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）对神经胶质瘤的体外杀伤作用。方法 向外周血单个核细胞分别加入不同细胞因子组合，诱导出DCs、CIK细胞和LAK细胞，DCs负载胶质瘤抗原后激活CTLs，MTT法检测对胶质瘤细胞的体外杀伤效应。结果 CTLs对胶质瘤细胞的杀伤作用明显强于CIK细胞和LAK细胞（F=6.42～8.26，q=8.02～10.18,P＜0.01）；CIK细胞对胶质瘤的杀伤作用明显强于LAK细胞（q=8.43～9.24,P＜0.01）。CIK细胞对K562细胞的杀伤作用明显强于LAK细胞和CTLs（F=5.36～7.69，q=7.23～9.56,P＜0.01），LAK细胞对K562细胞的杀伤作用明显强于CTLs（q=8.83～9.15,P＜0.01）。结论 从人外周血中诱导出的DCs负载胶质瘤抗原后，激活的CTLs在体外对胶质瘤细胞能产生高效而特异的杀伤作用.freelor efficacy among LAK, CIK and CTLs activated by dendritic cells in vitro. MethodsPeripheral blood monocytes a lysates, DCs phocytes into cytotoxic T lymphocytes for glioma cells. The cytotoxicity a cells （F=6.42-8.26，q=8.02-10.18,P＜0.01). CIK a cells, respectively （q=8.43-9.24,P＜0.01) (F=5.36-7.69，q=7.23-9.56,P＜0.01). LAK killed more K562 cells than CTLs did （q=8.83-9.15,.freela cells effectively and specifically ,ight play a great role in clinical therapy. ［KEY CSF、rhIL4及rhTNFα等试剂均购自STRATHMANN BIOTECH GMBH，PE标记鼠抗人CD1a、CD80、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD56、CD83、CD86、HLADR单抗及鼠IgG1PE购自IMMUNOTECH,COULTER公司，RPMI 1640购自GIBCO公司，胎牛血清购自杭州四季青生物制品有限公司，淋巴细胞分离液购自上海试剂二厂，MTT、二甲基亚砜购自SIGMA公司，IL2、IL1、CD3McAb、γIFN等试剂购自北京邦定生物制品有限公司。 1.2 标本来源 神经胶质瘤来源于青岛大学医学院附属医院神经外科2003年1～12月经病理诊断为胶质瘤的病人，共20例，男女各10例；年龄10～65岁，平均47岁；其中Ⅰ级4例，Ⅰ～Ⅱ级2例，Ⅱ级4例，Ⅲ级5 例，Ⅳ级5例。K562白血病细胞由中科院惠赠。 1.3 细胞制备 1.3.1 LAK细胞的制备 取病人外周静脉血，用肝素抗凝，淋巴细胞分离液水平离心机梯度离心（2 000 r/min,20 min），吸取界面白膜层细胞，即为外周血单个核细胞（PBMC），接种于24孔板，加入含体积分数0.10的FCS、106 U/L IL2的RPMI 1640培养液培养，每隔3 d换液，第6天收获细胞。 1.3.2 CIK细胞的制备 外周血PBMC接种于24孔板，加入γIFN 106 U/L，24 h后加入5×105 U/L IL1及IL2，100 μg/L CD3 McAb，隔天换液，补充IL2，剂量同前。第14天收获细胞。 1.3.3 DCs的诱导及CTLs的制备 分离外周血PBMC，加入24孔培养板，每孔1 mL,在37 ℃体积分数为0.05 CO2的饱和湿度培养箱内贴壁2 h，除去非贴壁细胞，用含rhGMCSF(106 U/L)、rhIL4(106 U/L)和体积分数为0.10 FCS的RPMI 1640培养液培养贴壁细胞，每3 d半量换液并补充新鲜细胞因子，第7天加入50 μg/L rhTNFα，第10天收获DCs。 将原代培养的胶质瘤细胞用培养液悬浮成浓度为5×109/L的细胞悬液，在-80 ℃冷冻2 min，37 ℃水中溶解4 min，反复4～5次，裂解物离心（8 000 r/min,20 min）收集上清，0.2 μm滤器过滤，肿瘤抗原与DCs以3∶1比