树脂吸附法分离苦瓜皂苷的工艺研究论文.docVIP

　　树脂吸附法分离苦瓜皂苷的工艺研究论文 【摘要】 目的研究苦瓜总皂苷的纯化方法。方法苦瓜醇提的浓缩液，通过经处理的NKA大孔吸附树脂，用不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，UV法跟踪检测。结果80%乙醇洗液中苦瓜总皂苷的含量最高，可达到36%。结论 NKA大孔吸附树脂可有效地分离提取苦瓜总皂苷。 【关键词】 苦瓜 皂苷 提取 大孔吸附树脂 NKA树脂 Study on Extraction Technology of Aponins from Momordica charantia L.by Macroporous Absorption Resin Abstract：ObjectiveTo study on the extraction and purification methods of total Saponins in Momordica charantia L..MethodsMomordica Charantia L. ethanol isolated solutions passed through treated NKA macroporous absorption resin, and ade gradient elution ordica charantia L. saponins. Key ordica charantia L.; Saponins; Extraction; Macroporous adsorption resin; NKA resin 苦瓜Momordica charantia L.属葫芦科苦瓜属，是人们生活中的一种常用蔬菜，同时也是功能食品原料。国内外不少学者从不同地区、不同品种苦瓜及其种子中分离出了多种生理活性物质，其中苦瓜中含有的苦瓜皂苷、生物碱、植物甾醇等成分具有显著的降糖作用［1～4］。鉴于苦瓜皂苷的功效及药用价值.freelomordicoside A，实验室自制；大孔吸附树脂，商品号NKA、AB8和D101树脂，南开大学化工厂；LD52A离心机，北京医用离心机厂；玻璃层析柱：20 mm×600 mm；旋转蒸发器，上海精科实业有限公司；Cary紫外可见分光系统，美国VARIAN公司；薄层层析板G，青岛海洋化工厂分厂；玻璃点样毛细管，华西医科大学仪器厂；浓硫酸、冰醋酸和高氯酸等均为分析纯。 1.2 分析方法 1.2.1 苦瓜皂苷的含量测定［5］测定波长的选择：吸取 Momordicoside A甲醇标准液（1.274 mg/ml）80 μl,自然挥干溶剂，加5%草醛冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，摇匀、密塞，于60℃水浴加热15 min，冰浴冷却，加冰醋酸5.0 ml，用紫外可见分光系统测定吸收曲线［6］。选用545 nm为测定波长。 建立回归方程：分别吸取40，80，120，160，200 μl甲醇标准液置10 ml具塞试管中，同上法测定吸收度。皂苷含量和吸收值经回归处理，回归方程为：A=0.005 8C 0.112 5，r =0.999 4，(n=5)。苦瓜皂苷含量在40～200 mg线性较好。 样品溶液制备：洗脱液减压回收乙醇至干，用少量甲醇溶解后，3 000 r/min离心后移置10 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀备用。 样品皂苷质量分数的测定：同标准曲线制作方法，在最大吸收波长处测定吸光度，从标准曲线中找出对应的质量浓度。 总皂苷质量分数%=(样品液皂苷的质量浓度×样品液的体积/苦瓜粉末质量)×100% 1.2.2 洗脱液中总糖含量的测定洗脱液中总糖含量采用3,5二硝基水杨酸比色定糖法测定。采用无水葡萄糖配制标准溶液，制作标准曲线。于520 nm波长处测吸光度值，以吸光度值为纵坐标，以葡萄糖标准浓度为横坐标绘制标准曲线。糖的标准曲线见图2 ( Y= 2.936 5X-0.122 9,r=0.998 4)。 1.2.3 洗脱液中蛋白含量的测定采用Folin酚法测定洗脱液中蛋白质的浓度。以空白液为参比，在640 nm处比色测定。以吸光度值为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线见图3（Y＝0.004 1X-0.032 6， r=0.996 7）。 1.2.4 苦瓜皂苷TLC［7］ 展开剂：氯仿甲醇水(65∶35∶10，5～10℃放置12 h以上）的下层液为展开剂。显色剂：甲液取水25 ml，缓慢加硫酸50 ml，放冷后，再加乙醇25 ml，摇匀；乙液：8%香草醛无水乙醇溶液。用时将5份甲液与1份乙液混合。临用现配，80℃烘至斑点清晰。 2 方法 2.1 树脂的筛选 2.1.1 大孔树脂的预处理先于吸附柱内加入相当于装填树脂体积0.4～0.5倍的乙醇，然后将新树脂投入柱中，使其液面高于树脂上端3 mm处，浸泡