桃核承气汤对庆大霉素肾毒性大鼠的治疗作用研究论文.docVIP

　　桃核承气汤对庆大霉素肾毒性大鼠的治疗作用研究论文 刘煜敏，张悦*，郝艳鹏，王飞，陆敏 【摘要】 目的观察桃核承气汤对庆大霉素所致大鼠肾毒性损伤模型的治疗作用及部分机制。方法采用腹腔注射庆大霉素法制作大鼠肾毒性模型，通过生化、病理检测和蛋白免疫印迹方法观察各组大鼠肾功能、肾组织病理形态、氧化产物及酶类的变化及信号通路分子p38、核因子κB(NF-κB)蛋白表达的变化，明确桃核承气汤的疗效。结果桃核承气汤治疗一周后，可改善肾功能.freelicin-induced kidney lesion in rats.MethodsThe renal injury model icin i.p. The kidney index，pathomorphology，and level of oxidative production and expression of Nuclear Factor-κB (NF-κB) protein in kidney cortex easured to observe the effect of TCD on kidney injury of rats.ResultsAfter one eters of kidney indexes, oxidative production MDA and enzyme activity of NOS in kidney cortex of Gentamicin group e activity of SOD e therapeutic effect on Gentamicin-induced kidney lesion through alleviating renal oxidation. Key icin; Nuclear Factor-κB; Kidney injury 氨基糖苷类抗生素庆大霉素(Gentamicin， GEN) 临床应用于严重革兰氏阴性菌抗感染治疗，但其肾毒性和耳毒性也是我们不可忽视的重要方面。调查显示，在庆大霉素治疗的病人中有0.5%～30%可发生中毒性肾损害。虽然其确切机制尚不完全清楚，但研究表明庆大霉素可增加反应性氧化产物的生成，通过脂质过氧化引起肾功能的改变是其肾毒性发生的重要原因。本研究主要观察经典方桃核承气汤对大鼠庆大霉素肾毒性是否具有保护作用并初步探索药物作用机制。 1材料与仪器 1.1 动物健康雄性DA、SOD、NOS检测试剂盒购自南京建成生物公司。兔抗鼠p38抗体、兔抗鼠NF-κB抗体购自Cell Signal公司，小鼠GAPDH- HRP抗体购自上海康成公司，山羊抗兔Ⅱ抗购自明睿生物有限公司。BCA蛋白定量试剂盒、ECL化学发光试剂盒购自美国Pierce公司，PVDF膜购自Millipore公司。其他试剂均为国产分析纯。 1.3主要仪器全自动生化分析仪(KONELAB公司)，752型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)，酶标仪(BIOTEK公司)，电泳装置(美国Bio-Rad公司)。 2 方法 2.1 动物分组与造模实验动物随机分为正常对照组、模型组和桃核承气汤组各8只。各组动物均给予正常饮食，模型组和桃核承气汤组给予腹腔注射庆大霉素80 mg/kg体重造模，2次/d，连续9 d。第9日即断尾取血检测肾功能以确定模型制备是否成功。 2.2 给药方法及取材根据《人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表》换算动物用药量;桃核承气汤水煎剂生药浓度为0.438 g/ml。造模结束次日起，桃核承气汤组即按1 ml水煎剂/100 g体重灌胃，正常对照组和模型组予同体积生理盐水灌胃，直至取材。给药一周(7日)末腹主动脉取血处死动物，取双侧肾皮质分装后-80℃冻存备用。 2.3肾皮质MDA、SOD、NOS测定制备组织匀浆，按试剂盒说明书操作，采用比色法测定。 2.4蛋白免疫印迹法测定p38、NF-κB蛋白表达电动匀浆机匀浆，组织裂解液抽提肾皮质总蛋白后BCA蛋白定量试剂盒定量。取等量变性蛋白经10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)后转移至PVDF膜上，用含5%脱脂奶粉的TBS室温封闭1 h，后分别加入p38抗体、NF-κB抗体(1∶500)、GAPDH抗体(1∶5 000)，4℃摇动过夜。洗膜后用对应二抗(1∶5 000)杂交，室温孵育1 h。再次洗膜后用ECL试剂显色并曝光成像。复日图像分析系统扫描确定X光片上的杂交条带的光密度值。 2.5统计学方法计量资料用±s表示，采用SPSS16.0软件进行单因素方差分析。 3 结果 3.1庆大霉素肾中毒大鼠模型制备结果由表1可见，与正常对照组相比，模型组和桃核承气汤组大鼠血清尿素氮、血肌酐明显增高，提示庆大霉素肾中毒模型制备成功。表1模型制备第9 d各组大鼠