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桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨论文.doc
桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨论文
【摘要】 目的研究桑树总生物碱的分析方法和提取方法。方法采用理化反应和薄层色谱对桑叶生物碱进行定性定量分析。通过对桑树生物碱成分的结构特征的分析设计提取纯化方法。结果发展了桑树生物碱的薄层色谱方法,给出了从桑叶、桑椹、桑白皮和桑枝中提取总生物碱的方法。结论薄层色谱-可见分光光度法可用于桑树总生物碱的定量分析,所提出的总生物碱提取方法具有可操作性。
【关键词】 桑树; 总生物碱; 分析方法; 提取方法
Abstract:ObjectiveTo study the analysis and extraction methods for total alkaloids (MTA) in mulberry.MethodsIdentifying reactions and thin-layer chromatography (TLC) for qualitative and quantitative analysis olecular structural characteristics for extraction and purification scheme design ethod and extraction method of Folium Mori, Fructus Mori, Cortex Mori and Ramulus Mori ined by TLC-VIS spectrophotometry.The preparation process of MTA in this article is practicible.
Key ethod; Extraction method
大多桑树生物碱成分是野尻霉素(nojirimycin)的衍生物。野尻霉素最早于1965年从玫瑰产色链霉菌R-468 (Streptomyces roseochromogenes R-468)的发酵液中分得[1],1966年被鉴定结构[2],1967年合成得到1,5-imino-1,5-didesoxy-D-glucit (即1-脱氧野尻霉素,1-deoxynojirimycin,DNJ)[3]。之后,1976年从桑树(Morus spp.)中分得moranoline (即DNJ)[4]。由于nojirimycin,DNJ具有强的α-葡萄糖苷酶抑制活性[5.freelethyl chloroformate (FMOC-Cl),因FMOC-Cl有紫外吸收、亦有荧光,所以可用高效液色谱紫外检测[14]或荧光检测[15]或行测定;也可将DNJ乙酰化成为沸点较低的酯类,再采用气相色谱法检测[16];二是无需衍生,用高效液相色谱-蒸发光检测法(ELSD)直接测定[17]。显然,这些方法不够简便、对仪器要求较高,而且,除非有多种生物碱的对照品,否则无法对总生物碱进行测定。因此,寻找分析多羟基哌啶型生物碱的简便方法十分必要。
关于哌啶生物碱单一成分如DNJ的提取、分析的报道较多,但桑类药材总生物碱的分析方法和提取方法却未见报道,本文对此进行了探讨。
1 材料与仪器
桑叶总生物碱提取物为市售产品(DNJ含量 50%)。桑叶、桑椹、桑白皮、桑枝药材购于成都荷花池中药材专业市场,经鉴定为Morus alba的干燥叶、果、根皮和嫩枝。硅胶G(青岛海浪化工厂)、732阳离子交换树脂(上海汇珠树脂有限公司)、中性氧化铝(成都市科龙化工试剂厂)、活性炭(成都市科龙化工试剂厂),其余各种试剂为化学纯或分析纯。TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。
2 方法与结果
2.1 桑树总生物碱分析方法的研究实验中以桑叶总生物碱提取物为样品进行了分析方法的研究;后经证实,桑椹、桑白皮和桑枝的总生物碱实验结果与之一致。
2.1.1 检识反应与生物碱沉淀试剂的反应:取桑叶总生物碱提取物适量,加蒸馏水溶解,以盐酸调pH 2~3,过滤,所得溶液为浅黄色,取5份,分别与碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、硅钨酸试剂、磷钼酸试剂、苦味酸试剂反应,结果见表2。表2 桑叶生物碱的检识反应(略)
碘化铋钾、硅钨酸、磷钼酸与样品呈阳性反应,可用于定性鉴别。
亚硝酸反应:考虑到DNJ属于脂肪族仲胺,应能与亚硝酸进行反应。试验时取上述桑叶总生物碱提取物的酸水溶液,置试管中,加入亚硝酸钠水溶液,结果产生气泡,持续时间近1 h,随着气体的逸出,试管口颜色逐渐变深,几乎呈褐色,而溶液的颜色则由浅黄色变为深黄色。
2.1.2 薄层色谱分析桑树生物碱的薄层色谱分析鲜有报道,主要是由于DNJ及其类似物显色困难。实验中取桑叶总生物碱提取物的水溶液,点样于硅胶G板上,以醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(6∶2∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,显色,
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