次声对α┐晶体蛋白分子伴侣活性的影响论文.docVIP

　　次声对α┐晶体蛋白分子伴侣活性的影响论文 【关键词】,.freel时αL-晶体蛋白对加热诱导过氧化氢酶（CAT）和βL-晶体蛋白凝聚的保护作用.孵育60min，以αL-晶体蛋白占对照靶蛋白光散射值的百分比表示α-晶体蛋白分子伴侣功能.结果与对照蛋白比较，α-晶体蛋白具有特异性保护CAT和βL-晶体蛋白热凝聚的作用.次声作用第16日，对照组αL-晶体蛋白保护βL-晶体蛋白热凝聚的作用为（92.0±3.1）%.freelolecularchaperone;infrasound Abstract:AIMToinvestigatetheeffectofinfrasoundonmolecularchaperoneactivityofα-crystallin.METHODSTheα-crystallinofbovinelensatog-raphyonSephacrylS-300HR.ThesolutionsofαL-crystallin（mg ml-1）fromnucleusalaggregationofcatalaseandβL-crystallineasuredspectrophotometricallyat360nm.Thechaperoneactivityofα-crystallininincubation.RESULTSαL-Crys-tallinspecificallyprotectedcatalaseandβL-crystallinagainstthermalaggregationparedalaggregationininfrasoundgroup（73.8±5.1%）alaggregationininfrasoundgroup（81.2±5.4%）olecularchaperoneactivityofα-crystallin. 0引言 晶体蛋白（crystallin）约占干燥晶状体质量的90%以上，而α-晶体蛋白是晶状体中主要的晶体结构蛋白.它除了维持晶状体结构完整，保持其屈光性外，还具有分子伴侣（molecularchaperone）活性，可抑制晶状体代谢酶和晶体蛋白对各种变性剂包括加热、紫外线辐射和化学性修饰造成的蛋白质非特异性的凝聚和失活，这在维持晶状体透明性中起到了重要的作用.同时，α-晶体蛋白并非是晶状体特异性蛋白质，它还存在于机体许多组织中，αB-晶体蛋白表达的增强见于神经系统退行性疾病如阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease）以及应激反应［1］.次声（infra-sound）为一种低频率（≤20Hz）的声波，具有独特的物理性质.它诱发机体组织和器官发生共振，并通过复杂的分子机制而影响各系统的功能［2-6］，可导致神经系统和眼组织的损害［7-9］.但适量的使用次声，还可治疗近视［10］.本研究采用α-晶体蛋白对重要的抗氧化酶-过氧化氢酶（catalase，CAT）和βL-晶体蛋白热凝聚的保护作用，作为分子伴侣的观察指标，观察次声（16Hz，130dB）是否影响α-晶体蛋白的伴侣活性，为次声作用分子机制的研究提供一定的实验依据. 1材料和方法 1.1材料牛肝脏CAT（EC1.11.1.6），鸡蛋溶菌酶、牛血清白蛋白等为Sigma公司产品，凝胶色谱柱SephacrylS-300HR为Pharmica公司产品.牛晶状体由西安协和食品加工公司提供. 1.2方法 1.2.1α-晶体蛋白分离和纯化［11］4只新鲜透明牛晶状体，去囊膜，分离皮质和核，将晶状体核匀浆（0.05mol L-1磷酸钠缓冲液，0.2mol L-1KCl，1mmol L-1EDTA，pH6.7），混合物22440g离心40min.采用凝胶色谱法分离晶状体结构蛋白（凝胶柱100cm×1.6cm，流速18mL h-1），根据色谱图分别收集αL和βL-晶体蛋白，透析24h，采用FTSSystem真空冷冻干燥仪（美国）低温冷冻干燥，-20℃储存备用.采用Bio-Rad蛋白电泳仪，参照Derham等的SDS方法检测α-晶体蛋白的纯度. 1.2.2次声作用将牛晶状体核αL-晶体蛋白溶解于50mmol L-1磷酸钠缓冲溶液（pH7.0），将αL-晶体蛋白磷酸钠缓冲溶液（1g L -1）分装于消毒玻璃瓶中，置于第四军医大学研制的电子激励式次声压力舱中，采用16Hz和130dB的声压，室温下作用2h d-1，持续16d，并分别于1，3，5，7，10和16d进行热凝聚实验. 1.2.3热凝聚实验次声组和对照组牛晶状体核αL-晶体蛋白分别与CAT（250mg L-1）和牛皮质βL-晶体蛋白（250mg L-1）按分子质量比（r7～8×105，由35～40个由αA和αB亚基组成，每个亚基Mr为2×