正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺论文.docVIP

　　正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺论文 【摘要】 目的研究千斤拔多糖的提取分离的最佳工艺条件。方法采用正交设计法筛选。结果千斤拔多糖的最佳提取分离工艺为：采用加热回流法，石油醚（30～60 ℃）回流3 h；滤渣用乙醚回流5 h；滤渣用95 % 乙醇回流5 h，滤渣用18倍量提取3次，2 h/次，提取液浓缩至10 ml，加入乙醇后使溶液中乙醇的浓度约为90% ，静置8 h后抽滤，真空干燥即得千斤拔多糖粗品。结论该实验为千斤拔多糖的提取分离的条件提供了参考.freelacrophylla(oghania ferruginea(oghania philippinensis(Merr. et Rolfe)Li.的根。苯酚试剂［5］: 取苯酚（CP）150 g，加铝片0.2 g和碳酸氢钠1.0 g，蒸馏，收集182 ℃馏份。称取10 g，加水200 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱中备用。 2 方法 以改良苯酚-硫酸法［5］ 测定千斤拔多糖的含量。 2.1 线性关系考察 2.1.1 葡萄糖标准溶液的制备精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品70 mg，用水稀释成为700 μg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5 ，1.0，1.5 ，2.0，2.5 ，3.0 ，3.5 ml置50 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，再精密吸取2.0 ml于具塞试管中。各管精密加入4.0 %苯酚溶液［3］1.0 ml，摇匀，迅速分别滴加浓硫酸7.0 ml，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出冷至室温后，于490 nm处测定吸光度值。以浓度C(μg·ml-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.004 6 C-0.005 8,r =0.999 6 (n=6)。结果表明，在2.86～10.01 μg·ml-1之间，葡萄糖浓度与吸收度值具有良好的线性关系。 2.1.2 粗多糖样品溶液的制备精密吸取定容后的粗多糖溶液20 ml置100 ml容量瓶中，稀释至刻度，精密吸取2 ml显色，备用。 2.2 精密度（重复性）实验取同一样品（S1）溶液，重复测定吸光度6次，RSD为1.26 %。结果表明方法精密度（重复性）良好。 2.3 稳定性实验取样品溶液，每隔0.5 h测定吸光度值，连续4 h，RSD为1.07 %。结果表明样品稳定性良好。 2.4 加样回收实验精密称取已知多糖含量的粗多糖溶液1 ml，3份，依次加入不同量的葡萄糖对照品溶液，取“2.1.1”项下的对照品溶液，按“2.1.1”项下测吸光度供试品溶液的制备方法，自“各管精密加入4.0 %苯酚溶液1.0 ml”起，依法操作，测得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的含量，并以葡萄糖标准溶液作对比测定，计算多糖回收率为98.73 %，RSD为1.41%（n=9）。 2.5 提取物中多糖含量测定精密吸取定容后的粗多糖溶液20 ml置100 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，精密量取2.0 ml置10 ml具塞试管中，按“2.1.1”项下测吸光度供试品溶液的制备方法，自“各管精密加入4.0 %苯酚溶液1.0 ml”起，依法操作，测得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的含量。粗多糖得率(% )=沉淀重量×多糖含量÷称样量×100% 。 3 结果 3.1 单因素考察 3.1.1 考察石油醚、乙醚、乙醇脱脂的必要性取千斤拔干燥粉末7份，精密称定，一份直接用水回流提取；一份用石油醚（30～60 ℃）回流6 h。滤过，取滤渣，挥去溶剂后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用乙醚回流提取6 h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份直接用乙醚直接回流提取6 h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用乙醚回流提取6 h，药渣挥去乙醚，再用95 %乙醇回流6 h，药渣挥去乙醚后用水回流提取；一份直接用95 %乙醇直接回流提取6 h，药渣挥去透剂后用水回流提取；一份用石油醚提取，药渣挥去溶剂后用95 %乙醇回流提取6 h，药渣挥去溶剂后用水回流提取。结果显示用石油醚、乙醚、95%乙醇都回流提取后，脱脂效果最好。 3.1.2 考察石油醚、乙醚、95 %乙醇回流时间分别逐步考察千斤拔药材分别经石油醚、乙醚、95 %乙醇回流2 ，3 ，4 ，5 ，6 ，7 h后，滤过，溶液在200～400 nm进行全波长扫描。确定其最佳回流时间。结果表明，石油醚的最佳提取时间为3 h；乙醚的最佳提取时间为5 h；95%乙醇的最佳提取时间为5 h。 3.1.3 考察不同的提取温度对千斤拔多糖粗品提取量的影响 称取千斤拔干燥粉末约5 g ，5 份，精密称定，各精密加入100 ml石油醚，分别回流3 h，过滤，药渣挥去石油醚，分别精密加入100 ml乙醚，分别回流