2017-5-17 分光光度计.pptVIP

0.208 光源 单色器 比色杯 检测器 (光电元件) 读数单元 3.3 分光光度计 紫外-可见分光光度计的基本结构示意图 * 可见和紫外分光光度计装有两种光源灯泡： 钨丝灯，产生可见光； 氢弧（氘）灯，产生紫外线。 * * 4. 仪器展示 * 721型可见分光光度计 * 722型分光光度计为什么每变换一次波长都需要重新调零？ 由于比色仪光电管对不同波长和频率的光的敏感度是不同的，所有每一次调换波长后都需要再次调零，是光电管检测的灵敏度调制适当的范围。 * 形成单键的σ电子，形成双键的π电子和分子中未成键的n电子。有机化合物吸收了紫外光或可见光以后，σ、π和n电子就要跃迁到高能量状态，即激发态。一般来说，未成键电子n最容易跃迁到激发态。 * 当一束太阳光照射某一溶液时，太阳光中某一颜色的光被吸收，其互补色光透过溶液，刺激人的眼睛，使人感觉到它的颜色。 * 吸收强度增加 * 吸收光谱体现了物质的特性，是进行定性、定量分析的基础。lmax是定性分析的依据，而溶液的浓度愈大，则吸光度A愈大，是进行定量分析的依据。 * * 由于玻璃吸收紫外线，所以氢弧灯的灯管多用石英制成，或在灯管上设有石英窗。 上海交通大学医学院 紫外-分光光度法 * * 概述 紫外－可见分光光度计 朗伯-比尔定律 仪器展示 概 述 紫外可见分光光度法(Ultraviolet-Visible Spectrophotometry)，又称:紫外-可见分子吸收光谱法(Ultraviolet-Visible Molecular Absorption Spectrometry)是利用被测物质对光的吸收特征和吸收强度对物质进行定量和定性的分析方法。 * 分光光度法的发展过程 分光光度法在发展过程中先后经过了目视比色法，光电比色法和分光光度法三个阶段。 （1）目视比色法是一种用眼睛辨别颜色深浅，以确定待测组分含量的方法。 （2）光电比色法是使用光电比色计测量溶液吸光度并计算待测组分含量。 （3）分光光度法是应用分光光度计，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度，对该物质进行定性、定量分析的方法。它包括紫外分光光度法、可见光分光光度法、红外分光光度法等。 * 紫外可见分光光度法的特点： (1)灵敏度较高(10-4 10-6g/ml) (2)精密度和准确度较高(0.2~0.5%) (3)选择性较好 (4)仪器设备简单、费用少、分析速度快、易于掌握和推广 (5)应用范围广 * 2、紫外-可见吸收光谱 电子跃迁类型 2.分子轨道 轨道： 电子围绕分子或原子运动的几率。 分子轨道：当两个原子靠近而结合成分子时，两个原子 的原子 轨道以线性组合而成。 C O H n p s H 1.分子中价电子类型：σ电子， π电子，n电子 * 2.1 吸光光度法基本原理 光谱名称 波长范围 X射线 0.1~10nm 远紫外光 10~200nm 近紫外光 200~400nm 可见光 400~760nm 近红外光 0.76~2.5um 中红外光 2.5~5.0um 远红外光 5.0~1000um 微波 0.1~100cm 无线电波 1～1000m 当光辐射通过某种物质时，组成该物质的分子与光子发“碰撞”，光子的能量就转移至分子上，使它们由基态(低态)跃迁到激发态(高能态)。 * 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 光谱示意 表观现象示意 复合光 黑色 蓝色 无色 2.2 光谱示意 3.有机化合物常见的跃迁类型有： ?→?*、n→?*、π→π*、n→π* 其相对能量大小次序为： ?→?* n→?* π→π*n→π*。 成键轨道：两个分子轨道中能量较低 的轨道，如σ、π 。 反键轨道：两个分子轨道中能量较高的轨道，如σ *、π * 。 非成键轨道：n电子能级基本保持不变 。 s p * s * R K E , B n p ?E n * 2.3 分子轨道 ?→?*跃迁 特征：发生在饱和烃；需要辐射能量很大； 吸收峰在远紫外区， λmax 150nm。 实例：甲烷为125nm 、乙烷为135nm n→?*跃迁 特征：发生在含有N、O、S和卤素杂原子的饱和 烃，需要能量较?→? *小；λmax ≈200nm。 * 2.4 电子跃迁 特征：所需能量较小；ε104，属于强吸收；孤立π→π*跃迁吸收峰在200nm左右；随着共轭双键的增多，所需能量越小，吸收峰长移； λmax随溶剂极性增加而向长波方向移动，称为红移 π→π*跃迁 特征：发生在含有杂原子的不饱和化合物中；ε比较小，10～100；吸收峰在近紫外区，200～400nm；λmax随溶剂极性增加而向短波方向移动，称为蓝移 n→π*跃迁（200～400nm） * * 物质对