临床基因扩增实验室室内质控摘要.ppt

临床PCR检验的室内质控方法 卫生部临床检验中心 李金明 存在的问题 概念不清 不知道具体怎么做 不会写室内质控的SOP 不知道如何选择室内质控物 不会分析室内质控的结果 室内质控SOP存在的问题 责任人不清。 质控物的来源及浓度不清或不全，并且通常没有说明阴性质控物的来源。有些是自制，但制备方法不规范，没有任何的质量检验，定量结果没有溯源性。 没有明确所选用的质控方法。对前20次的测定的室内质控没有解决方法。 没有明确的失控判断标准，只是做了一些失控的含糊叙述。并且一般都没有阴性失控的判断方法。 没有失控后的分析及处理措施。 室内质量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。 可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的：监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。 室内质量控制（IQC）的基本内容 主要包括三个方面： （1）测定前的质量控制； （2）统计学质量控制； （3）质量控制的评价。 测定前的质量控制 实验室设施、仪器设备及管理 理想的试剂和操作方法 人员培训 实验室设施、仪器设备及管理 实验室空间及工作流程的设计 实验室环境条件的控制：温湿度控制设备、稳压或不间断电源 临床PCR实验室设计的一般原则 各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作 临床PCR实验室质量管理的特点 “无基因”概念 实验室要有严格的人员进入限制和程序 使用合格的试剂和消耗品 PCR实验室“污染”的主要来源 临床标本中存在的大量待测微生物 科研中得到的质粒克隆 以前分析研究的特定微生物 大量存在于实验环境中的特定微生物 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的将造成假阳性的“污染”。 PCR实验室的重要防“污染”措施 实验室的严格分区及工作程序的严格遵守 化学方法：实验台面可使用10％的次氯酸钠（漂白剂）清洗 ；有些物品比如放置扩增反应管的盘必须从污染区转回到清洁区时，在转回之前，应将其置于2％~10％的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。 紫外照射：实验台面、仪器设备、实验室空间 UNG 仪器设备及管理 PCR仪、离心机、加样器、恒温设备等应建立技术档案，并定期维护;PCR仪、加样器、恒温设备应定期进行校准 理想的试剂:试剂的质检 核酸提取或标本处理方法的抗干扰能力（能否 有效地去掉PCR抑制物） 测定下限(Detection limit)（定性测定） 测定准确性和线性范围 批内变异和批间变异 试剂批间的一致性 有否污染 其他：外包装、试剂的完整性、有效期、说明书等 理想的操作方法 按照试剂盒说明书操作即可吗? 操作中影响测定结果的关键环节 写出具有可操作性的SOP 人员培训 培训所涉及的范围:仪器设备使用、维护和校准；试剂、方法原理；质量管理体系；相关法律法规、相关领域的新技术、新理念和新进展；实验操作技能等。 如何培训：讲座、讨论、自学和参加培训班等。 培训的评估：书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等。 统计质控方法 质控物浓度的选择 每次（批）测定质控物的数量及放置 质控规则 Levey-Jennings质控图方法 “即刻法”质控方法 “假阳性”的统计质控方法 质控物浓度的选择 定量测定：测定线性范围内的高、中、低三种浓度 定性测定：接近方法测定下限的浓度 阴性质控物 每次（批）测定质控物的数量及放置 标本数量如小于30，弱阳性和阴性质控各1份，标本数量增加，质控物数量相应按比例增加 均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取） 扩增时的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。 阴性质控样本的种类 阴性原血清样本 实验过程中带入的空管 仅含扩增反应混合液的管 阴性原血清样本的功能 监测实验室的以前扩增产物的“污染” 由实验操作所致的标本间的交叉污染。具体地说，如强阳性标本气溶胶经加样器所致的污染、强阳性标本经操作者的手所致的污染、使用翻盖离心管核酸提取时在较高温孵育时盖子崩开等 扩增反应试剂的污染。 核酸提取过程中带入的空管 监测核酸提取过程中的实验室“污染”的存在（在整个实验过程中，开口放置于核酸提取的操作台面区域内，最后以水为基质，进行扩增 ） 仅含扩增反应混合液的管 监测