广州大学小鼠离体细胞培养实验研究报告.doc

广 州 大 学 综合设计性实验报告 学 院 生 命 科 学 学 院 課 程 细 胞 生 物 学 实 验 实验项目 实验六 细胞培养 实验题目 小白鼠肝细胞的原代培养 专 业 生物技术 年级、班别 14级 姓 名 陈子禧 学 号 1414300004 任课教师 陈 鲲 完成日期 2016 年 5 月 23 日 [摘要] 目的 掌握小鼠肝细胞表皮细胞的体外培养方法 采用小鼠，，接种于进行体外培养并用培养法（酶解法以及表皮细胞的培养通过光镜观察细胞形态 结果?成功地培养出肝细胞表皮细胞肝细胞组在体外培养仍能够保持良好的生长状态。结论?本成功地了肝细胞的体外培养方法尤其在植块培养组中效果明显消毒 5.3结果汇总 8 致谢 1前 言 表皮细胞培养法（酶解法） 2实验原理 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。在准备过程中我们3.1器材 眼科剪（尖头、弯头）各一把、眼科镊（尖头）一把、培养皿一个、试管一支、（直、弯）吸管各一支、刻度吸管一支、吸管胶头三个、小烧杯一个、培养瓶一个等。上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，9.9×10 4Pa （15磅）灭菌30min，备用。此外，还有显微镜、酒精灯、酒精棉球、碘酒棉球、试管架、标记笔、恒温箱。 3.2试剂 3.2.1培养液 RPMI-1640 (2-3ml/培养瓶）, 基础培养基 80-90%、胎牛血清 10-20%、双抗 1-2% ,主要提供生长因子和细胞因子。抗菌素：1万单位青、链霉素占1%。 3.2.2组织清洗液 hanks液、PBS（Phosphate-Buffered Sallines） 3.3 材料 小白鼠幼体准备工作 4.1.1 进行清洗 1）浸泡：清水浸泡12小时 （2）刷洗：清洁剂、毛刷刷洗，清洁剂清洗2次，自来水冲洗5次，烘箱50℃烘干 （3）然后再浸入 5 ％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。（4）刷洗、烘干：12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。（5）泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾 120g ：浓硫酸 200ml ：蒸馏水 1000ml ）浸泡 12 小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15 次，最后蒸馏水冲洗 3-5 次和用双蒸水过 3 次。（6）烘干、包装：洗干净后先烘干，加脱脂棉，然后用纸包装。（7） 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅灭菌（8）烘干：进行烘干。4.1.2对器械和无菌操作台进行消毒灭菌 min照射，如青霉素、庆大霉素等。操室 (2)操作前放入所需器具并进行minUV灭菌，切记：严禁将培养液（含血清、蛋白等）UV下进行灭菌。 (4)取出需用的吸管（直、弯吸管各一支，刻度吸管一支）套上胶头，将 (5)打开培养皿以及解剖工具手持端的包装。 (6)在小组其他成员已打开腹腔的基础上切取小鼠肝脏组织块,并迅速取出肝 脏并将其放入Hanks 液中进行漂洗2次.移入小烧杯中。并同时剪取表皮组织进行anks液漂洗防止细胞脱水死亡7)接种与培养过程—植块培养 A 将拟培养的肝组织用眼科剪剪成约1mm3大小的植块，用hanks液适当漂洗，弃hanks液，加少量培养液；将组织稍微剪碎后放置胰蛋白酶中酶解min，上清液并立即加入培养液ml，并轻柔吹打上清液 C 用培养液湿润的吸管小心吸取肝脏植块,轻轻吹出到培养瓶的培养瓶面内,按照一定的间隔和形式用弯吸管将植块排列好。 D 翻转肝植块组将细胞组的上清液吸至培养瓶中 E 将培养皿加盖封口,送入37度恒温箱内,静置（加入的培养液不浸泡植块，不从瓶口流出）。 至于37度培养的细胞，需逐日进行观察，主要观察：（1）培养长与培养液颜色的变化，如培养液变为紫红色，一般细胞生长不好。