HO 1,NADPH 氧化酶在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织中表达及药物干预.pdfVIP

HO-1，NADPH 氧化酶在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织中 表达及药物干预 摘 要 目的：很多疾病都可以造成肾动脉狭窄动脉狭窄，其中最常见的原因是 肌纤维发育不良（FMD ）和动脉粥样硬化性肾动脉狭窄（ARAS ）。与FMD 相比，ARAS 更能引起肾脏损伤。在我国，ARAS 已成为引起肾动脉狭 窄的最主要的病因。近几年研究发现，一些抗高血压药物在降低血压的 同时，也具有肾保护作用，但其具体的保护机制是什么，现在还不是很 清楚。ARAS 可通过多种途径导致肾功能损伤，其中氧化应激成为几年 研究的主要途径，而血红素加氧酶-1 （HO-1）具有抗氧化功能，且已有 研究表明其具有一定的肾脏保护作用。在很多肾脏损伤模型中，HO-1 可 被一定的诱导因素诱导表达，起到肾保护作用，但不同降压药包括直接 肾素抑制剂，钙拮抗剂能否诱导 HO- 1 在动脉粥样硬化合并肾动脉狭窄 模型肾脏中表达，在国内外还罕有相关的报道。为此，本实验通过采用 夹毕单侧肾动脉，并联合高脂饲养及注射 VitD3 建立动脉粥样硬化合并 肾动脉狭窄动物模型,通过测定夹毕侧肾脏中HO-1 和NADPH 氧化酶的 表达情况来探索不同降压药（直接肾素抑制剂，钙拮抗剂）对肾脏的保 护作用及可能的机制，为临床能更有效的治疗肾动脉狭窄所致的肾损伤 提供理论依据和策略。 方法：（1）.动物模型的建立：将36 只雄性的SD 大鼠随机分为二肾 一夹（Two Kidney One Clip,2K1C ）组和对照组，2K1C 组采用平行针 灸针缩窄法造成肾动脉狭窄，对照组只暴露肾动脉，不做狭窄。各组大 鼠均予以注射VitD350 万IU/kg 并高脂饲养十周建立AS 合并肾动脉狭 窄动物模型。（2 ）直接肾素抑制剂和钙拮抗剂对肾动脉狭窄性大鼠肾脏 的保护作用的研究：饲养十周后，将对照组和满足实验条件的2K1C 组 大鼠分别随机分组并给与干预措施：生理盐水组，阿利吉仑组及苯磺酸 氨氯地平组,干预四周后处理大鼠，分别进行一下实验：1）游离并切取 SD 大鼠狭窄侧肾脏，一部分石蜡包埋做PAS 染色及免疫组化，一部分 -70 ℃冷冻保存。2 ）免疫组化法检测HO-1 和p47-phox(NADPH 氧化酶 的一种亚型) 的表达：取肾脏石蜡切片，采用 SP 法分别检测 HO-1 和 p47-phox 在肾脏中的表达变化。图像采集后用Image-pro-plus 6.0 软件 分析。（3 ）RT-PCR 法检测HO-1 和p47-phox 的表达：取冷冻保存的肾 脏组织经提取总RNA ，逆转录，扩增，电泳后，用Quangtity one 软件 分析. 结果：(1)免疫组化结果：比较相同手术造模方式的实验大鼠肾脏组 织中的HO-1, p47-phox 的表达的光密度值（IOD ）。1）肾脏组织中HO-1 的表达：2K1C 阿利吉仑组和氨氯地平组与生理盐水组间及阿利吉仑组 与氨氯地平组间的差异均有显著性（P0.05 ）2 ）肾脏组织中ph-47 的 表达：结果同上。(2)RT-PCR 检测相同造模方式各实验大鼠肾组织中 HO-1,与 p47-phox 的表达：以目标条带灰度值/ 内参条带灰度值表示， 与生理盐水组比较，HO-1 在阿利吉仑组与氨氯地平组中的表达均显著 增加，且阿利吉仑组较氨氯地平组的表达更显著。p47-phox 在阿利吉仑 组与氨氯地平组中的表达则显著降低，与免疫组化结果一致。 结论：直接肾素抑制剂阿利吉仑与钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平均能通 过抑制动脉粥样硬化性肾动脉狭窄肾组织中氧化酶的产生并促进抗氧化接 HO-1 的表达来减少肾损伤，且通过实验结果得出阿利吉仑肾保护作用优于 苯磺酸氨氯地平。 关键词：直接肾素抑制剂；钙通道阻滞剂；血红素加氧酶-1；NADPH 氧化酶；ARAS 。 The express of HO-1 and NADPH oxidase in atherosclerotic renal artery stenosis and drugs interference