内参基因在昆虫qRT-PCR中的研究进展教程.PDF

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第７期 — １— 史彩华，胡静荣，李传仁，等．内参基因在昆虫ｑＲＴ－ＰＣＲ中的研究进展［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（７）：１－７． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０７．００１ 内参基因在昆虫 ｑＲＴ－ＰＣＲ中的研究进展 史彩华，胡静荣，李传仁，王文凯 （长江大学农学院，湖北荆州４３４０２５） 　　摘要：实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）具有灵敏度高、特异性强等优点，是昆虫目标基因表达和转录分析最常用 的技术手段之一。然而，为了消除样本在ＲＮＡ产量、质量及逆转录效率上存在的差异，在进行ｑＲＴ－ＰＣＲ分析目标基 因表达量时必须选择合适的“管家基因”作为内参基因。近年来，大量研究表明不同昆虫和不同试验条件选择的内参 基因也不尽相同。因此，选择合适的内参基因是正确判断ｑＲＴ－ＰＣＲ结果分析的关键。从内参基因的选择、昆虫内参 基因的研究和内参基因稳定性评价等几个方面进行综述，以期为研究者在将来的昆虫试验中选择合适的内参基因提 供理论参考依据。 　　关键词：内参基因；昆虫；ｑＲＴ－ＰＣＲ；进展 　　中图分类号：Ｓ４３６．３３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０７－０００１－０７ 　　实时荧光定量 ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ，ｑＲＴ－ 近年来，随着ｑＲＴ－ＰＣＲ和基因芯片的广泛应用，内参基 ［１２］ ＰＣＲ）技术１９９６年由美国ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司发明，随后 因的研究报道日益增多 。本研究从内参基因的选择、昆虫 经过进一步技术升华，实现了基因表达检测从定性到定量的 内参基因的研究和内参基因稳定性评价等几个方面进行综 ［１］ 飞跃 。该技术具有高效快速、重复性好、定量准确、灵敏度 述，以期为研究者在将来的昆虫试验中选择合适的内参基因 高和高通量等优点，尤其可对样本量少、无法用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ 提供理论参考依据。 ［２］ ｂｌｏｔ等手段检测的样本进行精确检测 。因此该技术是昆虫 １　昆虫常用内参基因的选择及具备的条件 目标基因表达和转录分析最常用的技术手段之一。 ｑＲＴ－ＰＣＲ分为绝对定量和相对定量２种。绝对定量具 内参基因通常选择受环境因素影响较小、表达水平相对 ［１３］ 有高度特异性、重复性好，可进行多重定量，每次试验时必须 稳定的“管家基因” 。在细胞中，内参基因的表达量或在 做标准曲线来分析未知样品中目标核酸序列的绝对拷贝 基因组中的拷贝数几乎恒定。内参基因在不同类型的细胞、 ［３］ ［４］ 数 。由于标记成本太高，通常应用在临床诊断上 。针对 组织及不同试验条件下表达水平存在差异，因此，不同试验需 ［１４］ 基因的差异表达分析，科研工作者们最常用的检测手段是采 要选择不同的内参基因 。理想的内参基因不存在假基因， ［５］