水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽、维吉尼霉素M1残留量的检测方法分析.pdfVIP

水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽、维吉尼霉素 M1 残留量的检 测方法研究 摘 要 硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素均属于多肽类抗生素，可抗革兰氏阴性菌、革兰氏 阳性菌，对于一些真菌、病毒感染有很好的治疗效果。此类多肽药物常被用于预防动物疾 病和促进动物生长。近些年由于多肽类抗生素的使用，对养殖水体环境造成了不可逆损伤， 养殖水产品产生药物残留，进而危害养殖产业，危害人体健康。本论文研究了水产品中硫 酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素 M1 残留量检测的的液相色谱串联质谱法、硫酸粘菌素残 留检测的高效液相色谱-荧光检测法和水样中杆菌肽残留检测的液相色谱串联质谱法。课题 主要进行了以下4 方面的研究： 1）建立了同时检测水产品中硫酸粘菌素、杆菌肽和维吉尼霉素M1 残留量的液相色 谱串联质谱法。样品经甲醇-0.1% 甲酸水溶液 （V/V=2/5 ）提取，4%三氯乙酸乙腈除蛋 白，乙腈饱和正己烷除脂，过OASIS HLB 小柱净化，利用液质联用仪，以选择反应监 测模式检测，外标法进行定量分析。检出限分别为硫酸粘菌素 10 µg/kg、杆菌肽10 µg/kg、 维吉尼霉素M1 2 µg/kg，定量限分别为20 µg/kg、20 µg/kg、4 µg/kg ；选择3 个不同浓 度水平做加标回收，平均回收率在72.3%～103.9%，相对标准偏差为1.10%～10.92%。 最后选取7 种不同水产品做验证试验，3 种多肽的平均回收率为76.9%～107.5% ，相对 标准偏差在8.20% 以内。 2 ）建立了水样中杆菌肽残留检测的液相色谱串联质谱法。在对水中杆菌肽提取、净 化条件进行分析的基础上，探讨了不同固相萃取小柱对提取效果的影响，并对固相萃取步 骤进行了一系列优化，建立了最佳分析方法。方法的线性范围为5 ng/mL～5000 ng/mL ， 检出线为5 ng/mL，定量限为10 ng/mL 。取不同地方的海水，对方法进行验证，杆菌肽的 平均回收率为79.1%～99.0%，相对标准偏差为1.02%～6.69% 。 3 ）建立了水产品中硫酸粘菌素残留量检测的高效液相色谱—荧光检测法。实验研究 了不同衍生化试剂的衍生化效果，对衍生化试剂的衍生化时间、衍生化 pH 值进行了一系 列优化。同时，还研究了不同的色谱柱对分离效果的影响，确定了最佳的实验方法。经验 2 证硫酸粘菌素在0.03 ng/g～6 ng/g 浓度范围内线性良好(R 0.999),检出限为30 µg/kg 。选 择3 个浓度水平作加标回收，回收率在88.8%～97.5%范围，相对标准偏差为5.01%～6.91% ； 选择6 种不同水产品在150 µg/kg 浓度水平下作加标回收，回收率在80.7%～96.0%范围， 相对标准偏差在10%以内。 4 ）分析了上述3 种检测方法的不确定度来源，并对3 种方法的检测结果进行了不确定 度评估。经方法分析，确定了这3 种方法中对检测结果影响较大的不确定度因素主要是标 准曲线测量待测物浓度时引入的不确定度和样品的回收率引入的不确定度等。针对这些影 I 响因素，在进行检测过程中应针对这几个环节，采取相应措施尽量减小不确定度对测量结 果的影响增加检测结果的可信度。 综上所述，本文建立了水产品中 3 种多肽类药物残留量检测的高效液相串联质谱 法、硫酸粘菌素残留量检测的高效液相色谱-荧光检测法和水样中杆菌肽残留量检测的高 效液相串联质谱法。方法样品前处理较简便、结果准确，通过验证实验，这3 种方法对于 该类药物的残留检测工作具有实际的参考和应用价值。 关键词：硫酸粘菌素，杆菌肽，维吉尼霉素M ，液相色谱串联质谱法，高效液相色谱-荧 1 光检测法，不确定度 II Development of Detection Methods for Colistin Sulfate, Bacitracin and Virginiamycin M Residual in Aquatic