第1章蛋白质结构与功能(已看)资料.ppt

* 六、蛋白质的呈色反应 茚三酮反应 双缩脲反应 Folin-酚反应 考马斯亮蓝反应 * 2.根据溶解度分 等电点沉淀 盐析（常用硫酸铵） 有机溶剂沉淀 3.根据电离性质分 电泳 离子交换层析 1.根据分子大小分 透析或超滤 离心沉淀 凝胶过滤层析 蛋白质分离纯化的常见方法 4.特异亲和力： 亲和层析 沉降平衡离心法 沉降速度离心法 * 第六节 蛋白质的一级结构测定 * 一、样品的纯度要求： 杂蛋白不应超过5% 二、氨基酸组成分析： 分析每条肽链中氨基酸的种类和数目 三、多肽链的末端分析和序列测定 ： 通过末端残基的确定可估计蛋白质中的肽链数目 四、二硫键的拆开： 用变性剂拆开链间和链内二硫键 五、肽链的部分水解： 将很长的肽链切割成适合于作序列分析的足够小的片段 六、完整多肽链顺序的确定： 用肽段重叠法确定整个肽链的氨基酸排列顺序 七、二硫键的定位 ： 氨基酸序列分析完成后，还需另加确定二硫键位置的实验步骤 State 1 State 2 Proteome 1 Proteome 2 蛋白质组学 （Proteomics） 蛋白组的表达 翻译后修饰 pathway 蛋白质相互作用 蛋白活性 生物标志物 药物靶标 A screening technology for analysis of proteins’ properties at global scale. 1. 凝胶电泳 2.基于质谱技术蛋白质组学的策略 400 600 800 1000 1200 1400 1600 m/z 680.1 1164.5 1065.4 1221.5 994.4 456.3 555.2 b12 b11 b10 b9 b9 b8 y5 b132+ y4 -H2O MS/MS of (M + 2H)2+ 810.9 400 600 800 1000 1200 1400 m/z 811.4 MS of Bombesin H 2 N - C - C - N - R 1 O H C - C - N - R 2 O H C - C - N - R 3 O H C - C OOH R 4 H H H b1 y3 b2 y2 b3 y1 H 2 N - C - C - N - R 1 O H C - C - N - R 2 O H C - C - N - R 3 O H C - C OOH R 4 H H H b1 y3 b2 y2 b3 y1 400 600 800 1000 1200 1400 1600 m/z 680.1 1164.5 1065.4 1221.5 994.4 456.3 555.2 b12 b11 b10 b9 b9 b8 y5 b132+ y4 -H2O MS/MS of (M + 2H)2+ 810.9 400 600 800 1000 1200 1400 m/z 811.4 MS of Bombesin H 2 N - C - C - N - R 1 O H C - C - N - R 2 O H C - C - N - R 3 O H C - C OOH R 4 H H H b1 y3 b2 y2 b3 y1 H 2 N - C - C - N - R 1 O H C - C - N - R 2 O H C - C - N - R 3 O H C - C OOH R 4 H H H b1 y3 b2 y2 b3 y1 Protein Protein Database M/Z Proteolytic Peptides MS/MS Fragment Patterns Proteolytic Peptides GLSDGEWQLVLNVWGK VEADIPGHGQEVLIR LFKGHPETLEK FDKFKHLK SEDEMK ASEDLK ... Isolation Identified proteins GLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHG QEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLK SEDEMKASEDLKKHGATVLTALGGI LKKKGHHEAEIKPLAQSHATKHKIP VKYLEFISECIIQVLQSKHPGDFGA DAQGAMNKALELFRKDMASNYKELG FQG 2.5 基于二级 MS/MS 的生物信息学分析 Theoretical Manual verificat