微生物限度检查用及环境监测用培养基的配制、灭菌和贮存效期验证.doc

题 目 微生物限度检查用及环境监测用培养基的配制、灭菌和贮存效期验证 类 别 技术标准 编 码 STP-WJ001-02 版 次 第 1 版 制 定 人 审 核 人 批 准 人 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 质量部 发布日期 生效日期 分发部门 制定依据 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》 变更历史 起草 ■ 修订□ 原编码： 变更原因 《药品生产质量管理规范》变更 目 的：本试验通过对微生物限度检查用培养基的配制方法、灭菌程序以及配制后贮存条件和贮存效期进行验证，确保每次配制的培养基质量均满足2010版《中国药典》要求。微生物限度检查用培养基试验中培养基的配制方法、灭菌参数贮存条件（）及贮存时间（天），对贮存0天、天、天和天的培养基进行适用性检查。 培养基制备，合理存放，以及质量2010年版《中国药典》（一部 附录）中规定：“若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查实验可只进行一次，如果培养基的制备过程未经验证，那么每一批培养基均要进行适用性检查试验”大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44102〕金黄色葡萄球（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26003〕〔CMCC（B） 〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B） 63501〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F） 98003〕 仪器设备（）；（）；JJ电子天平（ ）；（）； 3.方法和结果 3.1. 试验环境 试验在洁净度为A级的单向流空气的洁净操作台进行，其环境洁净度为C级。检验过程严格遵守无菌操作。 3.2. 培养基的配制方法和灭菌参数 3.2.1.培养基的选择：分别随机抽取接近效期的脱水培养基各3瓶，按照《中国药典》培养基适用性检查中规定的方法，试验分别进行3次独立试验，每次从培养基中各选取1瓶进行试验。培养基包装上的配制说明，装入灭菌器中以程序进行灭菌。℃冷藏柜密闭贮存30天，每天记录冷藏柜温度。 3.3.2. 贮存后的使用方法灭菌贮存已经凝固的固体培养基，使用前，先于微波炉中化，待培养基完全化后，置于45℃左右的恒温水浴锅中，待培养基温度达到45℃后使用；灭菌贮存后的液体培养基可直接使用。 .3.3. 贮存时间培养基名称缩写检查项目 无菌性促生长能力抑制能力指示能力营养琼脂培养基 √ × × 大肠埃希菌金黄色葡萄球枯草芽孢杆菌 玫瑰红钠琼脂培养基 √ × × 白色念珠菌黑曲霉 大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA） √ √ × × 大肠埃希菌金黄色葡萄球枯草芽孢杆菌 曙红亚甲蓝琼脂培养基 √ × √ 大肠埃希菌 MUG培养 √ × √ 大肠埃希菌 培养基 √ √ × 大肠埃希菌金黄色葡萄球 营养肉汤培养基 √ √ × × 乙型副伤寒沙门菌 四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB） √ √ √ × 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌悬液的制备大肠埃希菌金黄色葡萄球枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉用无菌的0.9%氯化钠溶液制成1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。营养琼脂大肠埃希菌金黄色葡萄球枯草芽孢杆菌玫瑰红钠琼脂白色念珠菌黑曲霉方法 营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基取大肠埃希菌金黄色葡萄球枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注，每株试验菌平行制备个平皿，混匀，凝固，营养琼脂培养基置30～35℃培养48h玫瑰红钠琼脂培养基置23～28℃培养72h被检营养琼脂培养基上的平均菌落数玫瑰红钠琼脂培养基的平均菌落数不小于对照培养基上菌落平均数70%，且菌落形态大小对照培养基上的菌落一致。固体培养基促生长能力检查取大肠埃希菌0.1mL（含菌数100cfu，测定结果见表3）涂布于被检平板上，在30～35℃培养。试验菌被检培养基上菌落大小、形态特征、指示反应情况大肠埃希菌取大肠埃希菌1mL（含菌数100cfu，测定结果见表3）在30～35℃培养应取1mL（含菌数100cfu，测定结果见表3）置30～35℃培养8h后观察现象；取金黄色葡萄球菌菌悬液2ml（不少于100cfu接种被检中，置30～35℃培养，不生长取1mL（含菌数100cfu，测定结果见表3）置30～35℃培养8h后，与对照培养基比较； 3次试验中乙型副伤寒沙门菌在被检培养基中生长良好，培养基变浑浊；培养取1mL（含菌数100cfu，测定结果见表3）置30～35℃培养8h后，与对照培养基比较；3次试验中乙型副伤寒沙门菌在被检培养基中生长良好，培