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ZTOPO-TA零背景快速克隆试剂盒.PDF
版本号:2015-07-27
ZTOPO-TA零背景快速克隆试剂盒
ZTOPO-TA Zero Background Fast Cloning Kit
(目录号:ZC206) 含多克隆酶切位点
·快速 ·简单 ·高效 ·连接片段长
·无自连,无需繁琐蓝白斑筛选,阳性克隆率
接近100%
·使用Topoisomerase可在 5min内完成连接
·可以连接长达10kb片段
(即使5kb片段,也有超过80%的阳性率)
·本载体带有T粘性末端,特别适合Taq 酶扩增
产物的克隆
ZTOPO-TA零背景快速克隆试剂盒 ZTOPO-TA Zero Background Fast Cloning Kit
■ 试剂盒组成、储存、稳定性 ■ 操作步骤
试剂盒组成 20次(ZC206-01) 60次(ZC206-02) 1. 连接反应的准备:
ZTOPO-T Vector(30ng/μl) 10μl 30μl 1) PCR产物制备:带“A”末端的PCR产物
877bp Control(TA 50ng/μl) 5μl 5μl ① 引物要求:引物不能磷酸化。
10 × TOPO Buffer 10μl 30μl ② 酶的选择:Taq系列的DNA聚合酶。
菌落PCR MasterMix(M13引物) 1ml 3ml 2) 纯度
保存:-20℃至少保存8个月。 推荐使用琼脂糖凝胶电泳切胶纯化回收目的片段(建议长波紫外光下切胶或者可见
光透射切胶,避免DNA损伤造成连接失败)。 本公司的小量琼脂糖凝胶DNA回收试剂
■ 产品介绍 盒或小量DNA产物纯化试剂盒可以对70bp以上的DNA片段有很好地回收效果。
本试剂盒是专门针对带有“3-A末端”的DNA片段TA克隆试剂盒。产品使用非传 3) 总量与浓度
统T4连接酶和先进的自杀基因筛选技术(无需繁琐蓝白斑筛选);可极快且高效连接 在通常状况下,没有必要对插入片段进行精确定量,一般载体与插入片段的摩尔比
DNA片段,阳性率高。 优化至1:1~1:10 就可以得到良好结果;推荐载体与片段摩尔比控制在1:3~1:7之间。
1. 无自连,无需繁琐蓝白斑筛选,阳性克隆率接近100%; 不同大小插入片段的推荐加入量:(5μl反应
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