血检四项化学发光法调查.doc

血检四项化学发光法调查 目前血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP）的检测方法主要有酶联免疫（ELISA）、核酸扩增（PCR）、胶体金标记、以及化学发光（CLIA）。现就CLIA在血检项目中的应用情况做一调查分析。 一．化学发光免疫分析法简介。 化学发光免疫分析法(Chemiluminescence imnunoassay，CLIA)是建立在放射免疫分析技术(radioimmunoassay，RIA)理论的基础上，以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法。 CLIA是利用化学反应中释放大量自由能，产生激发态中间体，当其回到稳定的基态时发射出光子（hν），用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。 表1 化学发光法类型 类型 原理及试剂 发光类型 化学发光 免疫分析 （CLIA） 用化学发光物质直接标记抗原或抗体组成 吖啶酯 （acrydinum esters） 化学发光 酶免疫分析 （CLEIA） 不用化学发光物直接标记免疫制剂。在酶免疫分析完成后加入化学发光底物，产生化学发光 1.辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2/Luminol系统；1. 2.碱性磷酸酶(AP)/1，2二氧乙烷稳定衍生物（AMPPD）系统 电化学发光 免疫分析 （ECLIA） 应用电致化学发光标记物与电化学手段相结合产生化学发光的免疫分析 三联吡啶钌（Rucbpy）32+ 三丙胺氨系统 微粒子酶联免疫 （MEIA）* 微粒子作为载体，标记酶催化底物产生荧光 碱性磷酸酶作用于4_ 甲基磷酸伞型酮生成4-甲基伞型酮(MU)，MU产生出荧光，其荧光生成速率与被测物浓度相关。 时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）* 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 铕（?Eu3+?）、?铽（?Te3+?）及钐（?Sm3+?）、?镝（?De3+?） 注：* 严格意义上属于荧光免疫。 二．国内外化学发光法的仪器和试剂情况。 国外化学发光法检测仪器的生产厂家以贝克曼、雅培、罗氏、拜耳BECKMAN ACCESS/ACCESS2 激素全球最好。速度较慢，肿瘤证不全 ROCHE Elecsys 2010/1010 项目比较全，速度比较快。试剂成本比较贵。 Abbott Axsym/ i2000/i4000 药物浓度最好。消耗大，启动慢 Bayer ACS 180/ADVIA centaur 速度比较快，但是故障高，维修成本贵 国内也逐渐有厂家研制化学发光试剂，配合国外引进的仪器（多为半自动）共同销售，也有自发研制的化学发光仪（泰格科信北京科美生物北京源德生物北京泰格科信北京科美生物VeritasTM） 美国Turner Biosystems化学发光法北京科美东雅 国外公司 HBsAg 北京科美东雅，北京泰格科信，郑州绿科，重庆埃夫朗，厦门波生 Roche，Ortho，Sorin，Abbott 北京科美东雅 HCV 北京科美东雅 HIV 北京科美东雅 三．化学发光法的优势及劣势。 上世纪70 年代末，Halmann 和Vela首先把化学发光(CL)与酶免疫反应结合起来，建立了化学发光酶免疫分析法(CLIA)。目前，它已成为生命科学研究中的一个重要的分析手段，广泛应用于核酸分析、蛋白质分析、免疫分析、进行基因分析、发光成像分析、细胞分析等方面。其主要优势有： 1. 低检测限（高灵敏度）：就HBsAg检测，国内ELISA试剂检测限平均为0.5ng/ml，而胡国茂等试验显示化学发光检测限可达0.1ng/ml。Thoai Duong Ly.等对欧洲常使用的HbsAg检测试剂进行评测，检测线检测（HbsAg含量为0.04ng/ml—2.24ng/ml的系列血清）结果显示各试剂盒灵敏度均低于0.2ng/ml。值得注意的是，伯乐公司的Monalisa Ultra酶联免疫试剂盒达到了0.08ng/ml，甚至优于化学发光类仪器的检测。王丽梅等也证实Abbott的Murex HBsAg酶免试剂盒也可达到0.1ng/ml检测限。可以说，化学发光灵敏度只是优于目前的国内产品，单从技术角度，ELISA应和化学发光法等优。 表5 五种HBsAg检测试剂灵敏度评价 HBsAg 试剂盒 Advia Centaur HBsAg Liaison HBsAg Vidas HBsAg Ultra AxSym HBsAg V2 Monolisa HBsAg Ultr