卫生管理SOP-009层流净化区(室)沉降菌检测操作规程.doc

目的：本文件规定了层流净化室区沉降菌检测的标准操作规程。以规范层流净化室区沉降菌监测的标准操作，使其监测规范化，避免人为错误。 范围：本规程适用于层流净化区，包括生物安全柜及传递窗，沉降菌的监测。 权责： 中心负责人：负责本文件的起草,培训并落实本卫生管理规程。 中心工作人员：负责对本操作规程的实施。 定义： 静态测试：层流净化区净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，层流净化区内没有生产人员的情况下进行的测试。 动态测试：层流净化室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。 单向流：1级~100级的室，均采用单向流的气流组织送风方式。空气经过净化天花中高效过滤器和静压箱的均压均流作用后，从送风口垂直送入。自天花送风口至室内两侧回风口，气流流经途中的同一截面的任意一点，气流的方向和速度均保持一致，气流流线单向平行，没有涡流。洁净空气似空气活塞般将室内的尘埃粒子以最快的速度型回风口排走，是洁净室在运行状态下始终保持洁净状态。 ~10万级洁净室的气流组织方向和100级以上的洁净室不同，洁净气流从天花送风口垂直送入，迅速向四周扩散、混合，同时将等量的气流从回风口排走。与单向流不同的是，室内的气流是以不均匀的速度呈不平行流动，伴有回流或涡流，它主要靠洁净的气流不断稀释室内的空气，将室内的污染逐渐排除，来实现净化。 作业内容： 沉降菌监测总则 沉降菌监测采样为平板暴露法进行空气采样。 空气培养实施的频次：每次清洁后，每月的空气培养由医院感染管理中心制空气培养需要的普通琼脂培养平板，频率为每两周一次常规清洁，若实验完成后，安排过清洁，常规清洁时间为上次清洁后，顺延两周；每季度实施一次院感监控，直接从本院临床微生物中心领取平板，采样后，由临床微生物中心负责培养、鉴定和结果报告。 监测试剂 空气培养需要的普通琼脂培养平板。 测试步骤 培养基平皿的制备 将已制备好的培养皿按采样点要求的布置点放置。打开培养皿盖，使培养基在空气中暴露30分钟，再将培养皿盖盖上后并倒置。 全部采样结束以后，将培养皿倒置。 。 测试规则 测试状态 沉降菌测试前，洁净区或洁净室的温湿度必须达到规定的要求；换气次数、空气流数必须控制在规定值内。 测试前室应全面消毒。 测试状态为静态测试，并在报告中注明。 测试人员 静态测试时，室内测试人员不得多于人。 测试时间 对单向流，如100级净化工作台，测试应在正常运行10 min后。 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30后。 采样点布置采样点的位置工作区采样点的位置离地0.8m—1.5m左右（略高于工作面）。 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 图1 平面采样点布置图 最少培养皿数 在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数，见表5.6.3. 表2 最少培养皿数 洁净度级别 最少培养皿数（φ 90 mm） 100 14 10,000 2 100,000 2 300,000 2 采样次数 每个采样点一般采样一次。 层流净化区沉降菌采样布点图 详细分布如详见图2。 图2 层流净化室（区）沉降菌采样布点图 生物安全柜及传递窗的采样布点及标准 生物安全柜 布点位置设内、中、外对角线3点，内、外点布点部位距生物安全柜内壁10 cm处；评判标准按百级计。 传递窗 布点位置为正中1点；评判标准按相邻两洁净室较高级别的洁净度等级计。 记录 测试报告中应记录测试区域的温度、相对湿度及测试状态。 结果计算 用计算方法得出各个培养基的菌落数M1+M2+M3+……Mn 平均菌落数M平= ————————— n 式中： M平——平均菌落数 M1——1号培养皿菌落数 M2——2号培养皿菌落数 M3——3号培养皿菌落数 Mn——n号培养皿菌落数 结果判 层流净化室（区）沉降菌技术要求 针对各不同洁净级别的层流净化区的沉降菌评判要求，参照GB/T 16292-2010。详见表3。 表3层流净化室（区）沉降菌技术要求 洁净度级别 澳大利亚TGA CGMP (2002年8月16日) 欧盟EU CGMP (2008年2月) 美国FDA CGMP (2004年9月) 药品生产质量管理规范(1998年修订) φ 90 mm CFU/4h φ 90 mm CFU/4h φ 90 mm CFU/4h φ 90 mm CFU/0.5 h 100 A级 ＜1 A级 ＜1 ＜1 A级 ≤1 - B级 ≤5 B级 ≤5 ≤3(1,000级) B级 - 10,000 C级 ≤50 C级 ≤50 ≤5 C级 ≤3 100,000 D级 ≤100 D级 ≤100 ≤50 D级 ≤10 用平均菌落数判断微生物限度检查室和洁净区空气中的微生物。 每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限。 若某区