天然药物学第11章天然药物研究开发.ppt

天然药物活性成分研究方法 （一）药物的筛选有两种方法： 1．分离纯化得到纯品化合物，然后再进行活性测试。 优点： (1)目标清楚，方法简捷，指标明确，标准同一。 (2)分得标准品后可进行多种药理活性的测试。 缺点： (1)如果选择的分离方法不当，活性化合物丢失的可能性极大。 (2)对于极微量活性化合物，这种方法很容易漏检 （一）药物的筛选有两种方法： 2．在活性筛选方法的指导下进行化合物的分离提取(Bioassay Directed Separation)。 在供试样品的活性确定以后，选用简易、灵敏、可靠的活性测试方法作指导；在分离的每一阶段对分离所得的各个组分进行活性定量研究和评价，跟踪其中活性的部分。 优点： (1)由于分离过程中，没有化合物类型的框框限制，只以活性为指标进行追踪，故发现新化合物的可能性很大。 (2)如果分离过程的某一阶段，如因分离方法或材料选择不当，导致活性化合物的分解变化或流散时，还能迅速查明原因，并可采取相应的措施进行补救。对天然活性化合物的分离来说，这是一种较好的方法。 （二）药物的筛选体系 1．体外活性测试 离体组织器官、细胞、酶、分子等水平的体外实验体系 体内活性测试 整体动物实验 3. 二者结合 （三）药物的筛选技术 1．高通量筛选 （high throughput screening technology） 20世纪80年代后期发展起来的用于寻找新药的高新技术, 高通量药物筛选的基本特点是对大量样品的随机筛选,这种方式正是发现创新药物的基本要求。因此，高通量药物筛选也就成为发现新药、开发创新药物的主要方式之一。 高通量药物筛选是在传统的筛选技术基础上，应用先进的分子生物学、细胞生物学、计算机、自动化控制等高新技术，建立的一套更适合于药物筛选的技术体系。它以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验数据，以计算机对实验获得的数据进行分析处理，在同一时间内对数以千、万计的样品进行检测，并以相应的数据库支持整个技术体系的正常运转。 2．高内涵筛选（High Content Screening，HCS） 指在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导各个环节的影响，在单一实验中获取大量相关信息，确定其生物活性和潜在毒性。 2．高内涵筛选 （High Content Screening，HCS） 从技术层面而言，高内涵筛选是一种应用高分辨率的荧光数码影像系统，在细胞水平上检测多个指标的多元化、功能性筛选技术，旨在获得被筛样品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息。高内涵筛选技术的检测范围包括：靶点激活、细胞凋亡、分裂指数、蛋白转位、细胞活力、细胞迁移、受体内化、细胞毒性、细胞周期和信号转导等。 3．计算机药物虚拟筛选 1、高投资、高风险、高投入、高回报。 2、 关键在于选择、建立先进的生物活性测试方法 有时体外活性测试方法所得结果与药物实际在体内的作用并不平行，故实践中也应予以注意。 3、确保供试材料具有活性 这是追踪分离活性化合物的前提，可采用多项指标、体内外进行测试加以确认。 （四）追踪分离天然活性化合物时的注意事项 3.在众多生物活性中力求找出最本质的作用 天然药物或中药在临床治疗上可能作用于多个靶点，因而具有多种疗效，即表现出多方面的活性。研究者应当力求找出其中最本质的作用，选择建立反映临床治疗作用特点、且效果与之平行的活性测试体系，才有可能追踪分离出目的活性成分或甚至有效成分。 （四）追踪分离天然活性化合物时的注意事项 4．注意正确比较并判断各个馏分的活性 天然药物化学研究方法  例：大黄泻下活性成分的研究 1.初步提取分离 生大黄粗粉依次用正己烷、氯仿、丙酮、乙醇、水提取，回收溶剂后，得各部分浸膏。 2.活性筛选 各部分浸膏以大白鼠口服后观察其致泻作用作为活性追踪指标。结果如下 3.水溶性部分分离 预试就是利用各类化学成分的溶解特征、化学反应特征来初步判断某类化学成分有无的预备性试验。 以便制定提取分离方法。 化学成分的预试方法有两类: 　　 一类为单项预试法，即根据工作