海藻保健食品中的色素分析-高效液相层析法.PPT

海藻保健食品中的色素分析- 高效液相層析法 分析實驗講義僅供校內修課學生參考 分析實驗課即將結束囉~~ 感謝大家互相體諒幫忙 意見調查表 課堂考試—筆記 實驗報告討論 報告補交6/8截止 海藻保健食品 從營養學的角度來看，綠藻至少提供消費者四大實用效益：A.供給豐富的鐵質和維生素。B.天然綠色植物的膳食纖維。C.天然綠色植物的葉綠素、β-胡蘿蔔素和葉黃素。D.提供綠藻生長因子(CGF)及其他細胞代謝活動所需的輔因子。 海藻體內的脂溶性物質具有抗癌活性。 海藻脂溶性抗癌活性物質主要來自類胡蘿蔔素。 海藻含有豐富的類胡蘿蔔素，除有抑制癌細胞的活性外，還有清除活性氧及他種自由基，減少多種疾病的產生及減緩人體老化的速率。 海藻的類胡蘿蔔素中以β－胡蘿蔔素及褐藻黃素最為重要 從而海藻的抗癌研究轉向朝癌細胞發生前的保健預防方向考慮。  海藻中的抗氧化及抗癌色素 實驗目的 學習使用HPLC儀器進行定性定量工作 學習如何從海藻保健食品中萃取色素以進行分析 Time IS Pig Intensity 葉綠素a 標準品 綠寶藻錠 樣品 定性分析 -滯留時間 2.4167 min 2.3833 min 定量分析 -積分面積 葉綠素a 標準品 綠寶藻錠 樣品 22.2894 Area 23.3140 Area 系統組成 層析系統的兩個主要組成 - 固定相 (stationary phase) - 流動相 (mobile phase) 與固定相親和力大者，易留滯原地； 與流動相親和力大者，易隨流動相移動， 因而達成分離的目的。 ? HPLC的原理 欲分離的成份需先溶於溶劑中，然後在高壓下注入分離管柱，樣品中的各個成份藉由移動相的帶動，滲透通過分離管柱中的固定相。 各成份的移動度依其平衡分佈狀態而定 -成份和固定相之間的作用力小，很快沖堤出 -成份與固定相之間的作用力大，則較慢沖堤出。 由於各成份與固定相的作用不同，造成移動速度的差異，因此產生分離效果。 HPLC之優點 速度快 解析能力高 靈敏度大 管柱可再使用 儲液器溶劑處理系統 高壓幫浦 樣品注入系統 分離系統 偵測記錄系統 儀器裝置 儲液器溶劑處理系統 高壓幫浦 樣品注入系統 分離系統 偵測記錄系統 儀器裝置 儀器裝置- 固定相 儲液器溶劑處理系統 高壓幫浦 樣品注入系統 分離系統 偵測記錄系統 分析管柱： 3μm Shandon Hypersil? MOS2 C8(6.2-6.8% carbon)column, 120? pore size, 100x4.6 mm 儀器裝置- 移動相 移動型式：Isocratic / Gradient沖提液A：100% methanol註：使需用層析級試藥，移動相需以 0.2 ?m 濾紙過濾，並以氦氣脫氣 海藻保健食品色素萃取 綠藻錠-葉綠素a標示26.5mg/g?取4錠研磨成粉狀?秤取0.1g ?加10mL丙酮震盪萃取?離心取上清液?0.22um過濾?稀釋100倍 完成 層析法分類 層析法 移動相 固定相 液相層析法(LC) 氣相層析法(GC) 超臨界流體層析法(SFC) 液相固相層析法(LSC) 液相液相層析法(LLC) 氣相固相層析法(GSC) 氣相液相層析法(GLC) 管柱層析法(column chromatography) 平面層析法(planar chromatography) 實驗流程 以丙酮進行海藻保健食品色素萃取 以HPLC進行色素分離 對照標準品以滯留時間(retention time)及全光譜圖進行波峰之定性 對照標準品以濃度與積分面積進行樣品物中各色素的定量工作 HPLC 高效能液相層析法High Performance Liquid Chromatography 高效能液相層析技術為分析技術中應用最廣泛的一種層析法。 HPLC有多種分離模式，因此可廣泛的應用於不同型態的化合物分析，其領域可適用於化學、化工、醫藥檢驗、農化、環境檢驗、生化、食品飲料等各類樣品分析。 RP-HPLC Reverse-phase C8 analytical column (RP HPLC) 極性較大者會先沖提出來，達到分離。 極性 非極性 介質 + 正相 逆相 液相層析管柱系統 定量分析 -積分面積 葉綠素a濃度比=積分面積比 標準品 1 mg/L：樣品 x mg/L = 22.2894：23.3140 求出樣品的葉