样 本 的 采 集教程.ppt

样 本 的 采 集 肛拭子与咽拭子标本可放入1～2ml无菌营养液或Hank液中送检，保存。 脑脊液2～3ml，直接放入灭菌管内送检，保存。 尸体解剖标本采集要考虑取中枢神经系统（特别是颈和腰部的脊髓灰质和桥脑）和降结肠标本，置于灭菌容器内，保存送检。 （二）标本处理 粪便标本2g加Hank液10ml制成20%悬液。3000r/min离心30min，取上清4～5ml，加活性炭200～250mg混匀，4℃1h后，3000r/min离心30min，取上清加抗生素（终浓度每毫升1000u青霉素，1000μg链霉素，下称“双抗”）4℃作用4h，接种肉汤培养。如有细菌生长，重复处理一次。处理好的标本-20℃保存。 肛拭子标本同粪便标本处理相同。 咽拭子标本的处理只需加抗生素作无菌试验阴性，即可-20℃保存。 尸体解剖标本1g，加入5ml Hank液，研磨成悬液，3000r/min，离心30min，取上清加双抗（终浓度每毫升500u 青霉素和500μg链霉素），4℃过夜，离心，取上清-20℃保存。 3. 流行性出血热病毒的样本 (一)样本的采集 1．鼠肺 将捕到的新鲜死鼠或活鼠(颈动脉放血致死)，置3％～5％来苏儿浸泡5～10min，用碘酒消毒背部(或前胸)皮毛，无菌解剖取出肺脏，分成大小两份分别编号， 小份制冰冻切片作间接免疫荧光染色；大份置4℃冰箱或一20℃以下低温冰箱暂时保存。选择特异性免疫荧光强阳性标本，可制成10％悬液供分离病毒用。其他动物脏器标本制备方法与鼠肺的相同。 2．病人血液 采血应在病人发病后5d内，愈早愈好。无菌采静脉血5ml，放冰壶内立即送实验室，分离血清(如将血液4℃保存，不应超过24h，将血清和血块分别冻存于一40C以下或液氮中备用。 选双份血清抗体检查确诊病例的第1份血清标本(最好是抗体反应阴性的血清或血块)作病毒分离标本之用。血清可直接用于接种细胞或动物，血块经研磨制成5％悬液后应用。另外有采用“床边接种”，即采血后立即将全血接种到敏感动物或细胞，因标本新鲜，有可能提高分离率。 有人采用病人的白细胞分离病毒，获得良好结果。分离白细胞的方法是：用注射器先抽取肝素lml，用它可采病人静脉血5～10ml，置试管内混匀，再加入60g／L葡聚糖1份于5份含肝素的全血中，于30C静置30min后，将上清液离心10min(1 500r／min)，用Hank液洗沉淀2次，再用Eagle液稀释白细胞到一定浓度后，直接接种敏感动物或细胞培养。 * * 一、样本的来源和种类 样本是供检出目的微生物或其相关物质的材料。所谓相关物质是指构成目的微生物的核酸脂多糖，蛋白质以及微生物的相应特异性抗体。从预防医学微生物的角度可将微生物分为卫生指标微生物和病原微生物二大类。 （一）检出卫生指标微生物的样本来源和种类 卫生指标微生物是指示外环境和食品以及日用品洁净度的微生物可以是单位容积或重量中所含微生物的总数或是以某种代表微生物，它是指示受病原微生物污染情况，如大肠埃希氏菌，粪链球菌和产气荚膜梭菌等，样本的来源是空气、水、食品、药品、化妆品及医院环境等。 1. 水样本的采集及处理 ①采样的容器水样瓶采集前必须进行灭菌并保证在运送保存过程中不受污染。 ②在采集自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒、然后将龙头打开，放水5~10分，再采集水样。 ③取外环境水样时，应选择有代表性的水源，一般应距水面10~15cm深处取样。 ④采集有余氯的水样时，应按每500ml水样加入1.5%硫代硫酸钠2ml，中和水样中的余氯。 ⑤采水量为瓶容量的80%，以便在检验时充分震摇水样。 ⑥水样作大肠菌群检测时，取水量为350ml。 ⑦水中病毒检测样本的采集（1）水中病毒数103/L可直接将水样接种细胞无需浓缩，病毒数102/L样本量为1~5L，=10/L，样本量为10~20L，1/100L样本量是500~1000L，（2）每次采2份样本，一份及时检测，一份低温保存备用。（3）如为间断污染，采水样时同时还应考虑采集水体底泥及水生生物，特别是贝类样本，因底泥及贝类中病毒可长期存在，并且浓度较高。 ⑧水中病毒检验样本浓缩处理原则： a. 有较高的和稳定的病毒回收率 b. 不受水质限制，特别是浊度的限制 c. 不受容量限制，可以处理大样本量 d. 操作过程尽可能快，以免损伤病毒 e. 浓集应有选择性，尽可能不浓集病毒以外的物质 f. 操作方法尽可能简单、容易、并且价廉 2. 食品中细菌检测的样本采集 食品采集是指在食品原料或成品中抽取具有代表性的样品，并保证这些具有代表性的样本在检验时能完全