HDL和LDL胆固醇检测方法学进展和比较.ppt

HDL和LDL胆固醇检测方法学进展和比较 班级：10检二  姓名： 陈艳慧  学号：6302410068 HDL HDL(high density lipoprotein)，运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子。俗称“血管清道夫”。 LDL LDL的功能是转运胆固醇到外围组织，并调节这些部血浆脂蛋白位的胆固醇从头合成。 血浆中的胆固醇是疏水性物质必须与血液中HDL,LDL和PL等一起组成脂蛋白 HDL-C的检验方法 超速离心法 电泳法 化学沉淀法 直接测定法 超速离心法 美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐。该法分三步进行：(1)超速离心(40000r/min，18.5小时)除去密度(d)＜1.006 kg/L富含甘油三酯的脂蛋白(CM、VLDL)。(2)下层悬浮液用肝素-MnCl2法(Hep-Mn2+法)离心沉淀(1 500×g，30分钟)，以除去富含apoB的脂蛋白［LDL、Lp(a)］。(3)测定上清液中chol含量，方法用CDC参考方法(ALBK法)。 电泳法 原理 在一定电场条件下，由于各种脂蛋白的分子大小及其在缓冲溶液中所带电荷数的不同，故在支持介质上迁移率亦不同。较小的HDL分子向阳极有较高的迁移率，可将HDL与VLDL、LDL区分开。 电泳法 Helena公司已开发可供REP快速全自动电泳仪使用的HDL-C检测试剂盒，其原理是：血清(1 μl)经琼脂糖凝胶电泳(400V，15分钟)后，将chol基质试剂均匀铺在凝胶表面，孵育一段时间(10分钟)后用10%冰醋酸固定，然后将凝胶烤干。570 nm波长下自动扫描即可确定HDL-C百分含量。同时将血清TC值输入，则可求得血清HDL-C值。 化学沉淀法 常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA)、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇(PEG)与某些两价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白都沉淀。 HDL中chol多用酶法(CHOD-PAP)测定。 美国Reference Diagnostics公司推出新一代磁化DS沉淀法检测试剂盒。其原理是单一沉淀剂与血清标本1∶5混合在一标本杯中，然后将标本杯放进磁盘，非HDL脂蛋白颗粒因被磁化，能很快被磁盘吸至杯底(沉淀)，而与HDL颗粒分离(上清)。此过程简单迅速，不需离心，无HDL共沉淀及含apoB颗粒沉淀不完全现象。结果准确，不受高TG干扰，比传统DS50-Mg2+法测定时间大大缩短，亦有一定应用价值。 直接测定法 清除法（反应促进剂-过氧化物酶清除剂清除剂和过氧化物酶清除法） PEG修饰酶法 选择性抑制法 免疫分离法（PEG/抗体包裹法和抗体免疫分离法） PEG/抗体包裹法 akuyama等用PEG和抗apoB、抗apoCⅢ抗体包裹非HDL的脂蛋白，然后用酶法直接测定HDL-C的自动化分析方法。 日本International Reagents公司已研制成功可供商品化自动检测的试剂盒。测定过程包括4种试剂：①低浓度的PEG4000，包裹CM、VLDL、LDL。②特异性抗apoB、apoCⅢ抗体，使CM、VLDL和LDL复合物凝聚。③酶试剂，用于检测上述复合物以外脂蛋白胆固醇(即HDL-C)。④盐酸胍试剂，终止酶促反应和溶解含apoB脂蛋白复合物，以免其干扰吸光度测定 选择性抑制法（PPD法） 应用两种不同的表面活性剂及多阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C。 第一反应中，加入多阴离子和分散型表面活性剂(亦称反应抑制剂)，LDL、VLDL和CM先在多阴离子下聚集，由于反应抑制剂与LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力，故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈。同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂，但由于亲和力较弱，其结合是可逆的 第二反应中，与胆固醇酶试剂一起加入具有对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力的可溶性表面活性剂(亦称反应促进剂)，由于反应促进剂对HDL可溶性的强特异性作用可置换其表面吸附的少量反应抑制剂，从而与酶试剂反应，达到无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。 超速离心