02核酸的结构与功能(本4).ppt

特点 miRNA siRNA 前体 内源性发夹结构的转录产物 内源或外源双链RNA（dsRNA）诱导产生 结构 22nt左右的单链分子 22nt左右的双链分子 加工酶 Dicer或类似Dicer的酶复合体 Dicer 功能 与蛋白质组成RISC，抑制翻译 与蛋白质组成RISC，降解mRNA（RNAi） 作用位点 mRNA的3’-UTR mRNA的任何部位 靶mRNA结合 不需完全互补 需完全互补 生物学效应 调控分化发育过程 抑制转座子活性和病毒感染 p56 一、核酸的一般理化性质 第三节 核酸的理化性质 p57 核酸为两性电解质，含酸性的磷酸基及 含氮碱基，酸性较强，酸性条件下稳定 核酸属大分子，粘度大 核酸提取困难： DNA易断裂，RNA易被降解 碱基含共轭双键，有吸收紫外线的性质，最大吸收峰在260nm处，可进行定性、定量分析。 二、紫外吸收 p57 50μg双链DNA 40μgRNA 33μg单链DNA A260=1.0相当于： 紫外吸收的应用 1. 核酸的定量 2. 判断核酸样品的纯度 纯DNA：A260/A280=1.8 纯RNA：A260/A280=2.0 p57 三、核酸的变性、复性和杂交 * DNA双链碱基之间的氢键属次级键，易被破坏 * 氢键的形成是自由能降低的过程，可自发形成 DNA变性和复性的基础： p57 维持DNA双螺旋稳定的碱基堆积力和氢键被破坏，导致DNA两条链完全解离，称DNA变性（denaturation）。 变性因素： 加热、盐浓度过低、过酸、过碱 尿素、酰胺等。 （一）变性 p57 p57 DNA变性不伴随共价键的断裂 伴随物理性质的变化 粘度降低 浮力增加 密度增加 增色效应 DNA热变性发生在较小的温度范围内，热变性曲线的中点称解链温度（melting temperature， Tm），即50%双螺旋结构被破坏的温度。 G-C含量越高，链越长，溶液离子强度越高，Tm越大 p57 盐浓度对DNA变性的影响 DNA的变性是可逆的，在适宜条件下，两条解离的DNA互补链再次互补结合形成双螺旋，这个过程称为复性（renaturation）。 * 复性导致A260减小，称为减色效应。 * 热变性的DNA经过缓慢降温后可复性， 这一过程称为退火（annealing）。 温度骤降则复性不发生。 最适宜的复性温度比Tm低20~25℃。 （二）复性 p57 不同来源的核酸变性后，混合在一起，只要含有可以形成碱基互补配对的序列，复性也可以发生在不同来源的核酸链之间，形成杂化双链，这个过程称为分子杂交（hybridization）。 （三）分子杂交 p58 杂交可以是: DNA/DNA, RNA/RNA, DNA/RNA 应用： 标记一个来源的核酸，通过杂交可以检查 另一来源的核酸中是否含有相同的或相似 的互补片段，这种标记的核酸就称为探针. probe p58 探针 分子杂交 缓慢冷却 快速冷却 热变性 印迹杂交技术 DNA印迹 (Southern blotting) RNA印迹 (Northern blotting) 蛋白印迹(Western blotting) 第四节 核酸酶 DNA酶（DNase） RNA酶（RNase） 核酸外切酶 核酸内切酶 5’末外切核酸酶 3’末外切核酸酶 按催化底物分 按催化部位分 一般性内切核酸酶 限制性内切核酸酶 核酸酶(nucleases)是所有可以水解核酸的酶的总称。 分类： p57 作 业 （一）名词解释 增色效应 （二）简答 简述mRNA、 tRNA、 rRNA的生理功能。 （三）论述 论述DNA双螺旋结构的要点。 * 3. DNA双螺旋结构具有多样性 螺距（nm） 残基数 直径（nm）螺旋方向 A型(75%,Na) 2.86 11 2.3 右旋 B型(92%,Na) 3.54 10.5 2.4 右旋 C型(66%,Li) 3.08 9.33 1.9 右旋 D/R hybrid 2.55 8.5 Z型