2012-6-20承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所试验设计.DOC

2012-6-20 承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计：刘波 试验项目：氟氯氰菊酯降解条件的响应面优化 试验人员：胡桂萍 试验负责：胡桂萍 报告日期：2012-6-10 计数月份：2012年6月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计，实施实验，记载，分析清晰，结论清晰文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话: 0591 传真: 05911．试验目的 试验方法 球形芽孢杆菌FLQ-11，见图1 图1 氟氯氰菊酯降解菌球形芽孢杆菌FLQ-11的电镜扫描图 培养基 基础盐培养基：，４３ｇＬ，２４，２４，４·２。 培养基：酵母膏，蛋白胨，。固体培养基为液体培养基中添加琼脂。Table 1 Box-Behnken experimental design with three independent variables. Run X1 X2 X3 Responses (degradation rates %) 1 1 0 -1 57.55 2 -1 0 1 58.93 3 0 1 1 68.60 4 1 -1 0 51.13 5 0 1 -1 63.93 6 1 -1 0 52.55 7 0 0 0 78.67 8 0 0 0 75.91 9 0 0 0 78.99 10 0 0 0 77.72 11 1 1 0 45.18 12 -1 0 -1 48.04 13 0 -1 -1 57.46 14 -1 1 0 51.72 15 1 0 1 63.84 16 0 -1 1 58.11 17 0 0 0 74.30 X1: inoculum amount, -1(OD600=1.2), 0(OD600=1.6), 1(OD600=2.0); X2: temperature, -1(30℃), 0(35℃), 1(40℃); X3: pH, -1(6), 0 (7), 1(8). All the values were averages of three replicates. 2.4培养基中农药的提取 培养液中提取残留高效氯氰菊酯的处理过程:每重复取30 mL 添加农药的培养液, 分别加入60 mL丙酮, 采用超声波提取法提取(2×15 min)。提取液经铺2层滤纸的布氏漏斗减压抽滤, 将滤液全部移入500 mL 分液漏斗, 加入60 mL石油醚, 摇匀, 振荡30 min, 静置, 分层, 弃下层溶液, 取石油醚层溶液, 用20 g 无水硫酸钠过滤至250 mL圆底烧瓶。分液漏斗和无水硫酸钠用45 mL 石油醚分3 次洗涤,洗液并入烧瓶滤液中, 50°C 恒温浓缩, 将浓缩液全部转入10 mL 刻度试管, 并用3 mL 石油醚分3 次洗涤圆底烧瓶, 定容至5 mL, 取2 mL 经0.45 μm 有机膜注射式过滤器过滤, 滤液收集于试管中, 按照1.4方法测定菌液中高效氯氰菊酯含量。 2.5气质方法 在100 mL 选择性液体培养基中，加入终浓度为100 mg?L-1 的氟氯氰菊酯，接种5 ml FLQ-11菌液，光照培养，分别于1、3、5、7、15 d 取样，GC-MS 分析。 气相色谱-质谱（GC-MS）分析条件：型号Agilent 6890N/5975，全扫描，质量范围50~550；电子轰击能70 eV；色谱柱HP-5MS，进样口温度220 ℃，氦气流量1.0 mL?min-1。升温程序：初始温度120 ℃，保持3 min，以10 ℃?min-1 的速度升温到200 ℃，再以5 ℃?min-1的速度升温，终止温度250 ℃，保持5 min；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃。 3．试验结果 Y=77.12+0.81X1+1.27X2+2.81X3-1.28X1X2-1.15X1X3+1.01X2X3-15.95X12-11.02X22-4.07X32其中Y为氟氯氰菊酯的降解率，X1为pH，X2为温度，X3为接种量。由表二对方程的方差分析得到R2为0.922，说明92%是符合实验结果的。回复分析得到差异显著，p0.05。 Table 2 ANOVA for Response Surface Quadratic Model Analysis of variance table Source Sum of Squares df Mean Square F Value p-value Model 1894.23 9 210.47 8.