一种载样简单的多重可视化PCR微芯片.PDF

Hereditas (Beijing) 2017 年 6 月, 39(6): 525 ―534 技术与方法 一种载样简单的多重可视化PCR 微芯片 1 1 2 1 2 1 陈建伟 ，邵宁 ，张雨晨 ，朱元首 ，杨立桃 ，陶生策 1. 上海交通大学系统生物医学研究院,系统生物医学教育部重点实验室，上海200240 ； 2. 上海交通大学生命科学与技术学院，上海200240 摘要 : 在核酸检测领域急需一种能够经济、快速、操作简便且同时检测多个靶标的新技术。常规多重 PCR 能 够同时扩增多个靶标，但由于在一个试管中引物间的相互作用和竞争，重数往往受到限制。本研究设计了一种 操作简单的多重PCR 芯片，可以同时进行54 个靶标的扩增。芯片结构简单，一条微通道将正下方平行排列的 多个微孔连接在一起，微通道只留加样口和出样口。同时整个微通道呈疏水状态，微孔呈亲水状态。将不同的 引物对和低溶点琼脂糖提前固定于不同的微孔中，通过一次加入PCR mix ，并加入矿物油推动PCR mix 进入到 每个微腔室中，同时微孔也被矿物油相互隔离避免交叉反应。加样后将芯片放置于平板 PCR 仪上进行扩增， 在整个反应过程中低溶点琼脂糖呈液态,反应结束后凝固成固体，便可引入核酸染料进行染色，最后利用自制 小型的紫外照射仪上进行可视化检测和拍照记录。利用此平台成功实现了对7 种非常重要和常用的转基因作物 靶标的并行检测，结果显示此平台具有较高的灵活性和特异性。此技术经过进一步优化可应用于包括转基因检 测在内的多重核酸检测领域。 关键词 : 多重PCR ；微芯片；亲疏水；低溶点琼脂糖；转基因作物检测 A visual multiplex PCR microchip with easy sample loading 1 1 2 1 2 1 Jianwei Chen , Ning Shao , Yuchen Zhang , Yuanshou Zhu , Litao Yang , Shengce Tao 1. Key Laboratory of Systems Biomedicine (Ministry of Education), Shanghai Center for Systems Biomedicine, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China; 2. School of Life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China Abstract : There is an urgent demand for affordable, rapid and easy-to-use technology to simultaneously detect many different DNA targets within one reaction. Conventional multiplex PCR is an effective methodology to simul- taneously amplify different DNA targets. However, its multiplicity is limited due to the intrinsic interference and competition among primer pairs within one tube. Here, we present an easy multiplex PCR microchip system, which can simultaneously detect 54 targets. The de