微生物的纯培养与显微技术.ppt

* * * * * * * * * * * * * 技术获得的。 * * * * * 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 1 2 3 1：固体培养基；2：半固体培养基；3：液体培养基。 凝固剂的有无及含量 培养基的种类及用途 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 固体培养基：分离，琼脂含量1.6-2% 半固体培养基：运动性，琼脂含量0.5% 液体培养基：生长快，不含琼脂 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 菌落与菌苔 菌落(colony)：单个(或聚集在一起的一团)微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体 菌苔(lawn)：众多菌落连成一片 菌落与菌苔 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 菌落的一些特征 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 群体特征与个体特征 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据 思考题：为什么要求在特定的培养基上观察菌落的特征？ 菌落特征的重要性 使用固体培养基进行纯种分离 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 划线分离法 稀释分离法 (1)稀释分离法 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 同一个稀释度的大多数(95%)的试管没有细菌生长，则有细菌生长的平行管为纯培养 (2)划线分离法 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 操作较稀释法简单易行 分离到非优势微生物的几率较高 各种划线方法 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 单细胞(孢子)分离 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行； 操作难度与细胞或个体的大小成反比 确保为纯培养物 微生物的培养条件 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 温度 好氧或厌氧 培养基的成分 生长速度 厌氧微生物 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 与人类健康密切相关 最古老的生命 厌氧条件的获得 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 培养基中添加还原性物质 通过物理、化学方法驱除环境中的氧气 厌氧微生物的培养 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 耐氧微生物的培养 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （二） 专性厌氧微生物的培养 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （1）光学显微镜的分辨率取决于其透镜系统的数值孔径以及所使用光波的波长。常见明视野最大的分辨率为0.2μ m （2）明视野、暗视野、相差及荧光显微镜是最常见的光学显微镜类型。 （3）电子显微镜使用的不是可见光，而是波长很短的电子束，因此可以获得较高的分辨率（0.2nm）。常见的电子显微镜的种类有透射电镜、扫描电镜。 本章小结（1） 第二章 微生物的纯培养与显微技术 本章小结（2） （4）有时侯可以直接对微生物进行活体观察，活体观察制片的方法有压滴法、悬滴法以及菌丝埋片法。但大多数微生物是无色的，在明视野显微镜中难以看清，因此样品必须经过染色后才能进行观察。 （5）染色前固定的目的有两个：一是杀死微生物；二是增强染料对菌体的亲和力。固定的原理是使蛋白质变性。 （6）纯培养技术在微生物学的研究中具有重要意义，但随着微生物学的发展，纯培养技术又在一定程度上限制了微生物学的研究。 第二章 微生物的纯培养与显微技术 本章小结（3） （7）对微生物进行纯种分离的方法主要有稀释分离、划线分离和单孢子分离，划线分离由于简单易性而最为常用。 （8）厌氧培养技术是微生物特有的实验技术，对微生物学的研究具有不可或缺的作用。 （9）微生物学四大经典研究技术：显微技术、无菌技术、培养技术和染色技术。 * * * * * * * * * 各种光学显微镜的使用范围 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 暗视野显微镜：未经染色的活细胞，背景暗，标本亮，样品的轮廓、运动 普通光学显微镜：经染色的细胞，背景亮，标本暗 荧光显微镜：观察特异的细胞 相差显微镜：细胞内的细微结构 STORM（stochastic optical reconsctruc -tion microscopy，随机光学重建显微镜）荧光成像技术 突破光学衍射极限—超高分辨率 电子显微镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 光学显微镜 (? = 550 nm) 的分辨率为 220 nm。电子的波长比可见光小1000倍。 透射电镜 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 使用电子，电磁圈和荧光屏 第二章 微生物的纯培养与显微技术 （一） 分辨率：0.2nm(理论值) 透射电镜：细胞