微生物实验常识.ppt

表1 我国各主要土壤的含菌量(万/克干土) 土类 地点 细菌 放线菌 真菌 暗棕壤 黑龙江呼玛 2,327 612 13 棕壤 辽宁沈阳 1,284 39 36 黄棕壤 江苏南京 1,406 271 6 红壤 浙江杭州 1,103 123 4 砖红壤 广东徐闻 507 39 11 磷质石灰土 西沙群岛 2,229 1,105 15 黑土 黑龙江哈尔滨 2,111 1,024 19 黑钙土 黑龙江安达 1,074 319 2 棕钙土 宁夏宁武 140 11 4 草甸土 黑龙江亚沟 7,863 29 23 嵝土 陕西武功 951 1,032 4 白浆土 吉林皎河 1,598 55 3 滨海盐土 江苏连云港 466 41 0.4 1、取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约 2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。 盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎 石、植物残根等。土样取回后应尽快投入实验，同时取10- 15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重， 计算含水量。 2、 倒平板 熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平 板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。 8. 计数 选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数接近的稀 释度的平皿计数，通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300 之间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换 算成每克干土所含菌数。 同一稀释度的平均菌落数×稀释倍数 每克干土含菌数 = 1－土壤含水量％ 一、水样采集 自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。 水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 注意事项 严格无菌操作。 做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等项目。 从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在0～4℃下保存不应超过24h。 二、菌落总数的测定 — 平板菌落计数法 [方法] 稀释水样： 无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。 取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000水样。 [方法] 倾注培养： 用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。 菌落计数：方法同饮用水。 菌落总数测定 [结果分析与报告] 计算不同稀释度的平均菌落数： 稀释度的选择和菌落总数报告方式： 首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算。 计算方法和报告方式如表1所示。 由表2可判定水质被污染的程度。 表2 一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系 1.9灭菌与消毒 消毒：是指应用物理或化学方法杀死物体表面和内部的病原微生物，而对非病原微生物 及其芽孢并不严格要求全部杀死。用于消毒的化学物质，称为消毒剂。 灭菌：是指杀死一切病原菌和非病原菌及其芽孢，使物体上无任何存活的微生物 消毒与灭菌的区别 消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体. 灭菌是指杀灭一切微生物的营养体,芽孢和孢子. 干热灭菌法 灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品灭菌。 干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。 湿热灭菌法: 在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。 实验内容3（微生物的分离—平板划线法） 制平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10-1）在平板上划线。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法